2024年, 第44卷, 第03期　
刊出日期：2024-03-20

  

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  束缚应激通过激活Rho/ROCK通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤

  许光明, 高安迪, 丛斌

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 411-419.

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  目的 探讨Rho/ROCK信号通路在束缚应激诱导大鼠杏仁核血脑屏障损伤过程中的作用及机制。方法 选取60只SPF级雄性SD大鼠建立束缚应激模型，将大鼠分为4组：Control组（n=15，每日禁食水6 h）;Stress组（n=15，每日束缚6 h）;Stress+Fasudil组（n=15，每日束缚6 h，束缚前0.5 h给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）；Fasudil组（n=15，每日给予腹腔注射1 mg/100 g Fasudil溶液）。用高架十字迷宫实验（EPM）检测各组大鼠行为学变化，ELISA检测血清CORT和S100B水平，检测脑组织伊文思蓝（EB）的渗漏情况以评估渗透性的改变，免疫荧光法和Western blotting方法检测紧密连接蛋白Claudin-5、Occludin、ZO-1的表达变化，Pull-down实验和Western blotting检测Rho/ROCK通路的激活情况，透射电镜观察脑微血管内皮细胞超微结构的形态变化。结果 与Control组相比，Stress组和Stress+Fasudil组大鼠表现出了明显的焦虑样行为；Stress组和Stress+Fasudil组血清CORT含量均显著高于Control组（P<0.001）；与Control组和Stress+Fasudil组相比，Stress组EB渗漏含量和S100B含量均显著升高（P<0.05）;Stress组紧密连接蛋白的表达显著低于Control组和Stress+Fasudil组（P<0.05）;Pull-down实验和Western blot分析证实，Stress组RhoA-GTP(P<0.001)、ROCK2(P<0.001)、p-MLC2(P<0.05)的表达显著高于Control组和Stress+Fasudil组；脑微血管内皮细胞超微结构显示，Stress组呈现显著的形态学改变。结论 束缚应激能够通过激活Rho/ROCK信号通路诱导大鼠杏仁核血脑屏障的损伤。
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  抑制ddmmPAG区谷氨酸能神经元可减轻创伤后应激障碍小鼠的过度防御反应

  李言响, 郭永馨, 曹福羊, 郭舒婷, 薛丁豪, 周志康, 郝新宇, 仝黎, 傅强

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 420-427.

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  目的 探索背内侧中脑导水管周围灰质（dm PAG）谷氨酸能神经元对创伤后应激障碍（PTSD）小鼠过度防御行为的调控作用。方法 84只雄性C57BL/6J小鼠随机分为12组（7只/组）。研究PTSD后过度防御反应时，分为CON组和PTSD组；研究激活dmPAG区谷氨酸能神经元对PTSD后过度防御反应的影响，分为CON NS组，CON mCherry组，PTSD mCherry组和PTSD hM3Dq组；研究抑制dmPAG区谷氨酸能神经元对PTSD后过度防御反应的影响，分为CON NS组，CON mCherry组，PTSD mCherry组和PTSD h M4Di组。构建单效长时程应激模型（SPS）模拟PTSD状态，通过视觉本能恐惧实验、触须刺激实验、条件恐惧实验测试小鼠的防御行为，免疫荧光染色观察dmPAG区谷氨酸能神经元活性变化。结果 与CON组相比，PTSD组回巢潜伏期缩短（P<0.001），巢内停留时间百分比增加（P<0.01），防御评分增加（P<0.001），僵直时间百分比增加（P<0.01）。免疫荧光染色结果可见PTSD小鼠防御行为过程中，dmPAG区c-fos阳性的谷氨酸能神经元占比明显增加（P<0.001）。与PTSD mCherry组相比，激活dmPAG区谷氨酸能神经元后，PTSD h M3Dq组回巢潜伏期、巢内停留时间百分比无差异，防御评分升高（P<0.05），僵直时间百分数增加（P<0.01）。与PTSD m Cherry组相比，抑制dmPAG区谷氨酸能神经元后，PTSD hM4Di组回巢潜伏期延长（P<0.05），巢内停留时间百分比降低（P<0.05），防御评分降低（P<0.01），僵直时间百分比降低（P<0.01）。结论 抑制dmPAG区谷氨酸能神经元活性可以明显减轻PTSD的过度防御行为。
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  二甲双胍阻断乳腺癌细胞-间质细胞的交互作用：基于抑制肿瘤相关成纤维细胞缺氧诱导因子-1α的表达

  邵珊, 白薇超, 邹鹏程, 罗敏娜, 赵新汉, 雷建军

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 428-436.

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  目的 探讨二甲双胍（Met）对乳腺癌肿瘤-间质细胞交互作用的影响及机制。方法 将肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）与乳腺癌细胞共培养，运用二甲双胍进行干预，分为对照组和Met干预组，ELISA及RT-qPCR检测Met对CAFs中HIF-1α、p-AMPK、基质衍生因子-1(SDF-1)和白细胞介素-8(IL-8)等因子的表达变化以及Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。运用外源性SDF-1、IL-8干预后，Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。运用缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)shRNA或过表达质粒调节CAFs-HIF-1α的表达，以及AMPK-shRNA抑制AMPK的表达，并运用OG和2-OXO调节脯氨酸羟化酶的表达，及运用外源性TGF-β1干预后，Western blot及RT-qPCR检测CAFs中p-AMPK、HIF-1α、SDF-1、IL-8的表达，Transwell检测肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果 相较于对照组，Met干预组中CAFs的p-AMPK、SDF-1和IL-8的表达水平升高（P<0.05）,HIF-1α表达水平下降（P<0.05）,AMPK的表达水平差异无统计学意义（P>0.05）,Met组中乳腺癌细胞侵袭能力下降（P<0.05）。外源性SDF-1、IL-8干预可降低Met对乳腺癌细胞侵袭的抑制作用，增加乳腺癌细胞的侵袭能力（P<0.05）。过表达HIF-1α及运用脯氨酸羟化酶抑制剂OG提高HIF-1α的表达后，可降低Met对CAFs中HIF-1α、SDF-1及IL-8表达的抑制作用，并可降低Met对乳腺癌细胞侵袭的抑制作用（P<0.05）；运用HIF-1α-shRNA及运用脯氨酸羟化酶激活剂2-OXO抑制HIF-1α的表达后，降低乳腺癌细胞的侵袭能力（P<0.05）；运用AMPK-shRNA抑制p-AMPK的表达后，可降低Met对CAFs中HIF-1α表达的抑制作用，并可降低Met对乳腺癌细胞侵袭的抑制作用（P<0.05）；加入外源性TGF-β1后，可部分降低Met对CAFs中HIF-1α表达的抑制作用，并可部分降低Met对乳腺癌细胞侵袭的抑制作用（P<0.05）。结论 Met通过抑制CAFs-HIF-1α的表达进而发挥阻断乳腺癌细胞-间质细胞交互作用。
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  二甲双胍通过抑制铁死亡改善PM2.5导致的胎盘滋养细胞功能损伤

  李淑贤, 于淑平, 穆亚铭, 王凯, 刘玉, 张美华

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 437-446.

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  目的 探究PM2.5损伤胎盘滋养细胞导致不良妊娠结局的作用机制及二甲双胍的挽救作用。方法 将16只孕鼠随机分为空白组（n=8）,PM2.5染毒组（n=8），两组分别在妊娠1.5、7.5、12.5 d通过气管滴注PBS和PM2.5悬浮液。观察PM2.5对孕鼠妊娠结局的影响，并通过HE染色观察小鼠胎盘病理结构，检测胎盘组织铁死亡相关指标。体外构建PM2.5暴露的人类胎盘滋养细胞系HTR8/SVneo细胞染毒模型，利用CCK8实验检测细胞活性；利用EDU染色检测细胞增殖能力；利用划痕实验检测细胞迁移能力；利用Transwell实验检测细胞侵袭能力；利用成管实验检测细胞管生成能力；通过ELISA和Western blotting等方法分析铁死亡相关指标的表达。结果 体内实验显示PM2.5导致胎鼠的质量下降（P<0.001）、数目减少（P<0.01）、死亡率增加（P<0.001），同时胎盘质量也显著减少（P<0.001）,HE染色结果显示胎盘的结果受损；组织免疫荧光、ELISA及Western blotting结果表明PM2.5导致胎盘铁死亡的发生。体外实验显示PM2.5通过导致胎盘滋养细胞铁死亡抑制细胞增殖、迁移、侵袭、成管等生物学活性；二甲双胍可显著逆转PM2.5导致的滋养细胞铁死亡，包括细胞内GSH浓度和SOD活性增高（P<0.01）、MDA浓度降低和Fe离子含量降低（P<0.001）、GPX4蛋白和SLC7A11蛋白表达增高（P<0.05）等，同时二甲双胍显著改善PM2.5导致的细胞增值、迁移、侵袭、成管等生物学功能损伤。结论 PM2.5导致孕鼠不良妊娠结局及胎盘滋养细胞铁死亡和功能障碍，应用二甲双胍可有效改善细胞损伤。
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  黄蒲通窍胶囊改善Wilson病铜负荷大鼠的认知损害：基于抑制内质网应激介导的凋亡途径

  张笑颜, 王谢, 王杰, 邵楠, 蔡标, 谢道俊

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 447-454.

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  目的 探究黄蒲通窍胶囊（HPTQ）对Wilson病（WD）铜负荷大鼠模型的神经保护作用及其可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为6组：对照组、模型组、黄蒲通窍胶囊低剂量组（HPTQ-L,0.47 g/kg）、黄蒲通窍胶囊中剂量组（HPTQ-M,1.41 g/kg）、黄蒲通窍胶囊高剂量组（HPTQ-H,4.23 g/kg）、青霉胺组（PCA,0.09 g/kg）,10只/组。通过含铜（1 g/kg）饲料、含铜（0.185%）水喂养12周构建WD铜负荷大鼠模型，铜离子（Cu）测定试剂盒检测肝铜、24 h尿铜水平；Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆能力；HE染色法观察海马组织CA1区神经元形态学改变；TUNEL染色观察海马组织CA1区神经元凋亡水平；免疫荧光法检测内质网应激（ERS）标志蛋白GRP78的表达情况；RT-qPCR和Western blot法检测GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平。结果 与对照组比较，模型组肝铜及24 h尿铜水平明显升高（P<0.01）；学习记忆能力明显减弱（P<0.01）;CA1区海马神经元出现损伤；TUNEL阳性神经元数量增多（P<0.01）;GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平升高（P<0.01）。与模型组比较，HPTQ各组及PCA组肝铜水平降低、24 h尿铜水平升高（P<0.01）；学习记忆能力改善（P<0.01,P<0.05）；海马神经元损伤减轻；TUNEL阳性神经元数量减少（P<0.01）;GRP78、CHOP、caspase-12、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3基因和蛋白表达水平降低（P<0.01,P<0.05）。结论 HPTQ对WD铜负荷大鼠模型具有神经保护作用，其机制可能与抑制ERS介导的凋亡途径有关。
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  高表达UBE2S通过增加癌细胞干性促进肝癌的进程机制

  陈浩, 李振汉, 王明婷, 卢林明, 唐乾利, 罗良平

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 455-464.

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  目的 探究UBE2S在肝癌微环境不同细胞类型的特异性表达及对肝癌细胞干性的影响。方法 使用TCGA数据库分析肝癌中UBE2S转录水平及其启动子甲基化水平差异，使用CPTAC数据库分析UBE2S蛋白水平差异。使用TISCH单细胞测序数据挖掘UBE2S在不同细胞类型中的表达，并分析细胞通讯的强度以及细胞群各自的关键转录因子。免疫组化验证UBE2S在肝癌组织中的表达；多色免疫荧光检测UBE2S在肝癌细胞以及T细胞的表达情况。利用shRNA敲低肝癌细胞HCC-LM3中的UBE2S，分为shCtrl（对照组）、shUBE2S-1（敲低组1）、shUBE2S-2（敲低组2）3个组，利用克隆形成实验、悬浮成球实验检测UBE2S敲低对HCC-LM3干性影响。结果 UBE2S在TCGA数据库中非配对肿瘤组织中高表达（P<0.001），配对肿瘤组织中也高表达（P<0.001），随着肿瘤分级增高，转录水平逐渐增高（P<0.001）；在CPTAC数据库中肝癌组织UBE2S蛋白水平表达也增高（P<0.001）；肝癌中UBE2S启动子甲基化水平降低（P<0.001）;TP53突变组UBE2S转录水平更高（P<0.001）。单细胞测序结果显示，UBE2S在T细胞等细胞群高表达；内皮与上皮及成纤维细胞之间的细胞交互强度较高，SMAD1等转录因子可能是Tprolif细胞关键转录因子。与正常组织相比，UBE2S在肝癌组织高表达；且在肝癌细胞和T细胞中均有较高表达。克隆形成实验显示：与shCtrl组相比，敲低UBE2S能减少肝癌细胞克隆形成数目（shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.05）；悬浮成球实验显示：与shCtrl组相比，敲低UBE2S能减少肝癌细胞肿瘤球形成数目（shUBE2S-1,P<0.05、P<0.01;shUBE2S-2,P<0.01、P<0.01）。结论 UBE2S在肝癌组织T细胞中高表达，与预后不良相关，且其能促进肝癌细胞干细胞特性。
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  健脾滋肾方抑制系统性红斑狼疮患者的足细胞自噬：基于网络药理学和临床研究

  陈君洁, 黄传兵, 李明

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 465-473.

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  目的 基于网络药理学结合分子对接，通过临床验证，探讨健脾滋肾方从足细胞自噬途径治疗系统性红斑狼疮（SLE）潜在机制。方法 运用TCMSP、GeneCards、OMIM及TTD数据库获取健脾滋肾方及SLE、足细胞自噬相关靶点；取三者交集得到健脾滋肾方经足细胞自噬途径治疗SLE的潜在作用靶点。Cytoscape3.9.1构建“复方-成分-疾病-潜在靶点”网络及蛋白质互作网络，筛选出关键活性成分和靶点，进行分子对接。并临床纳入46例SLE患者和10例健康人，将SLE患者随机分为观察组（n=22）和对照组（n=21）。对照组口服醋酸泼尼松及吗替麦考酚酯，观察组在其基础上加用健脾滋肾方，疗程均为12周。运用ELISA检测SLE组及健康人群尿液中nephrin、synaptopodin水平；使用Western blot检测外周血内p-JAK1/JAK1、pSTAT1/STAT1、LC3II/LC3I、p62蛋白水平，并观察经健脾滋肾方干预后对SLE患者足细胞相关蛋白（nephrin、synaptopodin）、自噬水平（LC3II/LC3I、p62）及p-JAK1/JAK1、p-STAT1/STAT1表达影响。结果 经筛选得到健脾滋肾方经足细胞自噬途径治疗SLE的关键活性成分4种，核心靶点基因5个（STAT1、PIK3CG、MAPK1、PRKCA、CJA1）；富集分析显示可能涉及AGERAGE、JAK/STAT、EGFR、PI3K/Akt等信号通路。分子对接结果显示关键活性物质和核心靶点均有较好的结合活性。其中STAT1是结合活性最好的靶蛋白。临床试验证实健脾滋肾方能够显著降低血清中p-JAK1/JAK1及p-STAT1/STAT1、LC3II/LC3I蛋白表达水平（P<0.05或P<0.01），升高p62蛋白表达水平（P<0.05），降低尿液中nephrin、synaptopodin水平（P<0.05）。结论 健脾滋肾方经足细胞自噬治疗SLE具有多成分、多靶点、多通路协同作用的特点，其可能通过槲皮素、山奈酚、β-谷甾醇、异鼠李素等关键活性成分作用于STAT1靶基因，抑制JAK/STAT通路相关基因表达，调控自噬减轻SLE足细胞损伤。
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  马铃薯三糖甘草次酸衍生物通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂

  万欣, 洪崇竣, 王进绅, 宋高鹏, 刘叔文

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 474-483.

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  目的 研究马铃薯三糖甘草次酸衍生物能否通过抑制SARS-CoV-2进入靶细胞，作为潜在的小分子新冠病毒融合抑制剂。方法 以天然SARS-CoV-2进入抑制剂甘草酸为先导化合物，利用活性亚结构的拼合原理等设计并合成了系列马铃薯三糖甘草次酸衍生物。利用SARS-CoV-2假病毒体外细胞感染模型，检测该系列甘草次酸衍生物的体外抗SARS-CoV-2活性；利用表面等离子共振技术及假病毒模型寻找先导化合物1b的抗病毒作用靶点；利用SARS-CoV-2 S蛋白介导的细胞-细胞融合体系，检测先导化合物1b是否作用于SARS-CoV-2病毒入侵宿主的膜融合过程；基于分子对接与定点突变技术，确定先导化合物1b与S蛋白的作用模式等。结果 先导化合物1b对SARS-CoV-2奥密克戎假病毒有显著抑制作用，EC₅₀值为3.28μmol/L（P<0.05），对其它SARS-CoV-2变异株假病毒有广谱抗病毒活性。细胞-细胞膜融合实验显示1b能够抑制合胞体的形成。分子对接预测先导化合物1b可与S1与S2亚基交界处的空腔中的Glu³⁰⁹、Ser³⁰⁵、Arg⁷⁶⁵、Lys⁹⁶⁴等多个保守氨基酸残基产生氢键作用，亲和力为-8.6 kcal/mol。化合物1b在10、5、2.5、1.25μmol/L时对Arg⁷⁶⁵、Lys⁹⁶⁴、Glu³⁰⁹和Leu³⁰³突变后的假病毒的抑制活性显著降低（P<0.01）。结论 马铃薯三糖甘草次酸衍生物能够靶向作用于S蛋白，特异性干扰病毒-细胞膜融合阶段，继而发挥抗SARS-CoV-2感染的作用，是一类结构新颖的小分子SARS-CoV-2融合抑制剂。
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  艾司氯胺酮联合肢体远端缺血预处理对胸腔镜下肺癌根治术老年患者有肺保护作用：160例随机对照试验

  杨杨, 刘刚, 欧毅, 鹿文琪

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 484-490.

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  目的 探讨艾司氯胺酮联合肢体远端缺血预处理对行胸腔镜下肺癌根治术的老年患者的肺保护作用。方法 选取我院择期行胸腔镜手术的肺癌患者160例，随机分为对照组（C组，n=40）、艾司氯胺酮组（SK组，n=40）、肢体远端缺血预处理组（R组，n=40）、艾司氯胺酮联合肢体远端缺血预处理组（SKR组，n=40）。在麻醉诱导前，SK组以艾司氯胺酮0.5 mg/kg（稀释成10 mL）静脉注射；R组于左下肢腘窝上1～2 cm绑止血带，阻断一侧下肢血流5 min，然后恢复血流5 min，重复3次；SKR组联合上述两组处理方法；C组静脉给10 m L生理盐水，并仅于左下肢腘窝上1～2 cm绑止血带（无压力）30 min。分别于麻醉诱导前（T0）、单肺通气0.5 h（T0.5）、单肺通气1 h（OLV T1）、双肺通气后1 h（T3），抽取患者动脉血，测定动脉血气分析，计算氧合指数（OI）、肺泡-动脉氧分压差（A-aDO₂）；采集静脉血样，ELISA测定法检测诱导前（T0）、OLV 1 h（T1）、OLV 2 h（T2）、双肺后1 h（T3）、术后24 h（T4）时间点患者血清肺表面活性物质（SP-D），克拉拉细胞蛋白16（CC-16），肿瘤坏死因子（TNF-α）浓度；并记录患者的住院时间、术后肺部并发症情况。结果 最终C组有35例患者，R组33例患者，SK组34例患者，SKR组32例患者纳入分析。与C组相比，SK组、R组及SKR组的CC-16、SP-D、TNF-α浓度更低（P<0.05）；与SK组及R组相比，SKR组的CC-16、SP-D、TNF-α浓度更低（P<0.05）；与C组相比，SK组、R组及SKR组住院时间短，肺部感染、肺不张发生率低，且SKR组住院时间较SK组及R组更短，肺部感染、肺不张发生率更低（P<0.05）。结论 艾司氯胺酮联合肢体远端缺血预处理可能通过增强抗炎反应，减轻急性肺损伤，缩短肺癌术后患者住院时间、减少肺部并发症，促进患者术后恢复。
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  VA-ECMO患者院内死亡风险预测模型的构建及验证：一项多中心、回顾性、病例对照研究

  戈悦, 李建伟, 梁宏开, 侯六生, 左六二, 陈珍, 卢剑海, 赵新, 梁静漪, 彭岚, 包静娜, 段佳欣, 刘俐, 毛可晴, 曾振华, 胡鸿彬, 陈仲清

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 491-498.

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  目的 分析静脉-动脉体外膜肺氧合技术（VA-ECMO）患者死亡危险因素，构建并验证VA-ECMO患者院内死亡风险预测模型。方法 采用便利抽样，选取2015年1月～2022年1月广东省3家三甲综合医院ICU的302例VA-ECMO患者作为研究对象，随机分为建模组201例，验证组101例。运用单因素及多因素Logistic回归分析VA-ECMO患者死亡危险因素，构建VAECMO患者死亡风险预测模型并以列线图形式呈现。使用受试者工作特征曲线（ROC曲线）、校准曲线和临床决策曲线评价模型区分度、一致性及临床有效性。结果 预测VA-ECMO患者院内死亡风险的最终模型包括了高血压（OR=3.694,95%CI 1.582-8.621）、连续性肾脏替代治疗（OR=9.661,95%CI 4.103-22.745）、钠离子（OR=1.048,95%CI 1.003-1.095）、血红蛋白（OR=0.987,95%CI 0.977-0.998）。建模组预测模型的受试者工作特征曲线下面积AUC=0.829(95%CI 0.770-0.889)，高于4个单独危险因素（AUC<0.800）、APACHE II评分[AUC=0.777(95%CI 0.714-0.840)]、SOFA评分的[AUC=0.721(95%CI 0.647-0.796)]。内部验证结果显示模型的受试者工作特征曲线下面积AUC为0.774(95%CI 0.679-0.869)，拟合优度检验结果χ2=4.629,P>0.05。结论构建的VA-ECMO患者院内死亡风险预测模型区分度、校准度及临床有效性均较好，优于常用疾病严重程度评分系统，对评估重症患者疾病的严重程度及预后的风险水平有重要意义。
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  激活α7nAchR促进肥胖小鼠的脂肪稳态和米色脂肪生成及产热作用

  包汉生, 王苏童, 吕穆杰, 王永成, 姜萍, 李晓

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 499-506.

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  目的 观察肥胖小鼠脂肪组织形态学改变以及脂代谢、炎症等相关指标的异常表现，探索激活α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7nAchR）促进肥胖机体白色脂肪米色化产热的作用机制。方法 取诱导成肥胖小鼠40只和10只低脂进食小鼠，分为空白组、高脂组、模型组、激动剂组、抑制剂组（10只/组）。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠附睾白色脂肪组织，评估细胞数量、大小及形态。ELISA检测白色脂肪组织肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-1(IL1β)、白细胞介素10(IL10)、转化生长因子-β(TGF-β)表达水平。q RT-PCR检测白色脂肪一氧化氮合酶（iNOS）、精氨酸酶1(Arg1)mRNA。PCR检测解偶联蛋白（UCP-1）、PR结构域蛋白16(PRDM-16)、线粒体生成的关键调节因子（PGC-1α）mRNA水平。Western blot检测白色脂肪核转录因子P65(NF-κB P65)、磷酸化蛋白酪氨基酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化传导及转录激活因子3(p-STAT3)表达水平。结果 与空白组比较，高脂组体质量明显增加（P<0.01），白色脂肪组织中出现较多脂肪空泡，脂滴明显增大，iNOS mRNA及TNF-α、IL-1β水平升高（P<0.01），而Arg-1 mRNA及IL-10、TGF-β水平降低（P<0.01）；而与模型组相比，药物干预的3组体质量均有所减轻（P<0.05），白色脂肪中脂滴缩小。激动剂组白色脂肪中PRDM-16、PGC-1α、UCP-1 m RNA下降最为明显。而激动剂组TNF-α、IL-1β水平降低（P<0.05,P<0.01）,IL-10、TGF-β水平升高（P<0.01）,M1/M2巨噬细胞比值降低。结论 激活α7 nAchR后可以改善应用β3受体激动剂产生的白色脂肪组织稳态受损，促进白色脂肪中M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化减轻白色脂肪炎症反应，促进白色脂肪组织米色化，提高米色化产热效能。
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  HTD4010可减轻脓毒症心肌病小鼠的心肌损伤:基于促进AMPK/mTOR信号通路介导的自噬

  肖红敏, 韩保松, 郭家成, 吴超, 吴敬医

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 507-514.

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  目的 探究HTD4010对脂多糖（LPS）所致脓毒症心肌病（SCM）小鼠的作用及潜在机制。方法 将45只雄性ICR小鼠随机分为3组：对照组、LPS组（10 mg/kg）和LPS+HTD4010组（LPS注射后的1 h和6 h分别皮下注射2.5 mg/kg HTD4010）,15只/组。采用超声评价小鼠心功能，HE染色观察心肌组织病理变化，酶联免疫吸附试验检测小鼠血清和心肌组织中炎症因子IL-6和TNF-α的含量，TUNEL染色检测心肌细胞凋亡水平，蛋白免疫印迹法检测小鼠心肌组织中凋亡相关蛋白、自噬相关蛋白及AMPK/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平，透射电镜观察心肌线粒体超微结构。结果 与对照组相比，LPS组心肌病理损伤严重，有不同程度心肌纤维断裂及排列结构的紊乱、炎性细胞的浸润和线粒体损伤，心脏LVEF、FS值显著降低（P<0.01），血清和心肌组织中IL-6和TNF-α显著升高（P<0.01），心脏组织细胞凋亡率显著升高（P<0.01）,Bax、p-62、p-mTOR蛋白表达升高（P<0.05）,Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）。与LPS组相比，LPS+HTD4010组心肌病理损伤明显减轻，心脏LVEF、FS值显著升高（P<0.01），血清和心肌组织中IL-6和TNF-α显著降低（P<0.01），心肌组织细胞凋亡率显著减少（P<0.01）,Bax、p-62、p-mTOR蛋白表达降低（P<0.01,P<0.05）,Bcl-2、LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin-1、p-AMPK蛋白表达升高（P<0.05或P<0.01）。结论 HTD4010能够减轻SCM小鼠的心肌损伤，其机制可能与通过AMPK/mTOR信号通路促进自噬有关。
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  柴胡皂甙a减轻戊四氮诱发的皮质酮抑郁模型小鼠的急性癫痫发作：基于小胶质细胞介导的炎症反应

  熊一凡, 梁小珊, 梁晓涛, 李伟鹏, 钱益啸, 谢炜

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 515-522.

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  目的 探讨柴胡皂甙a(SSa)对皮质酮（CORT）抑郁模型基础上诱发小鼠急性癫痫的干预作用及机制。方法 选用雄性SPF C57BL/6J小鼠，使用皮质酮口服给药，制备CORT抑郁模型，之后予戊四氮诱发小鼠急性癫痫发作，并腹腔注射柴胡皂苷a进行干预。根据干预方式的不同将小鼠分成对照组、Epilepsy组、Epilepsy+SSa组、CORT+Epilepsy、CORT+Epilepsy+SSa组，6只/组。利用旷场实验、十字高架实验、强迫游泳实验、糖水偏好实验评估抑郁相关指标，通过ELISA实验检测血皮质酮含量；采用痫性发作分级、海马形态学评估癫痫发作程度；RT-qPCR检测炎症相关因子、免疫荧光实验观察小胶质细胞活化情况。结果成功构建皮质酮诱导的小鼠抑郁模型，小鼠的体质量、糖水偏好率、旷场的总路程、中央格停留时间和路程、开放臂进入次数和开放臂停留时间百分比均降低（P<0.05），强迫游泳不动时间和血清CORT含量增加（P<0.05）；与Epilepsy组相比，CORT+Epilepsy组小鼠痫性发作潜伏期缩短，发作次数、发作等级以及发作持续时间都明显增加（P<0.05），海马CA1、CA3区神经元Nissl体表达减少，Iba1阳性细胞的数量增多，同时，海马中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达水平升高。SSa干预后，Epilepsy+SSa组和CORT+Epilepsy+SSa组的癫痫发作潜伏期均延长，发作次数、发作持续时间、发作级别均减少（P<0.05），海马CA1、CA3区神经元的Nissl小体数量均增加、Iba1阳性细胞的数量均有所减少，海马中IL-1β、IL-10、TNF-α、IFN-γ的表达水平均降低（P<0.05）。结论 抑郁状态加重了癫痫发作、小胶质细胞活化及炎症水平更高，而柴胡皂甙a可能通过调节小胶质细胞介导的炎症激活，减轻抑郁合并癫痫小鼠的发作。
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  积雪草苷对离体大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制

  卢国庆, 孙红燕, 孙正宇, 刘乐强, 王磊, 张宁宁, 王宇航, 何一鸣, 纪佳慧, 李馨月, 康品方, 唐碧

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 523-532.

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  目的 研究积雪草苷降血压和对大鼠胸主动脉的舒张作用及机制。方法 将SD大鼠分为正常对照组、积雪草苷低剂量组（50 mg/kg）和积雪草苷高剂量组（100 mg/kg）,6只/组，治疗组每日予以积雪草苷对应剂量灌胃处理，分别在给药前1 d、给药第8天和给药第15天测大鼠尾动脉收缩压，HE染色评估大鼠胸主动脉血管组织形态变化。取大鼠胸主动脉血管环，以舒张血管百分比为指标，考察不同浓度积雪草苷对基础状态血管环、去甲肾上腺素(NE,1×10^-6mol/L)及氯化钾（KCl,60 mmol/L）收缩的内皮保留或去内皮胸主动脉血管环的舒张作用；对内皮保留的血管环，分别以左旋硝基精氨酸甲酯（0.1 mmol/L）、吲哚美辛(1×10^-5mol/L)、锌原卟啉Ⅸ（10μmol/L）和6种钾离子通道阻滞剂：四乙基氯化铵（5 mmol/L）、格列苯脲(1×10^-5mol/L)、氯化钡（0.1 mmol/L）、Iberiotoxin（0.1μmol/L）、4-氨基吡啶（0.1 mmol/L）、TASK-1-IN-1(1×10^-5mol/L)预孵育血管环，加NE(1×10^-6mol/L)预收缩，考察不同浓度积雪草苷对血管环的舒张作用；以血管收缩百分率为指标，在无钙条件下，分别以KCl（60 mmol/L）、NE(1×10^-6mol/L)刺激血管，再分别累积加入CaCl₂（0.1、0.3、1、3、10 mmol/L），考察积雪草苷对CaCl₂导致外钙内流及内钙释放引起的血管收缩的影响。结果 与正常对照组相比，积雪草苷50和100 mg/kg组大鼠收缩压降低（P<0.05），胸主动脉组织形态未见明显改变。累积浓度积雪草苷对静息状态下的胸主动脉内皮保留的血管环无明显收缩和舒张作用。积雪草苷（30、50、100μmol/L）对KCl和NE提前收缩的血管环具有舒张作用（P<0.01），积雪草苷100 mg/kg浓度组对去内皮和内皮保留的NE预收缩的血管舒张有差异（P<0.05）。经吲哚美辛、ZnPPⅨ、氯化钡、格列本脲、TASK-1-IN-1和4-氨基吡啶预孵育后，不同浓度的积雪草苷对经NE预收缩的血管环无显著影响（P>0.05），四乙基铵、Iberiotoxin和左旋硝基精氨酸甲酯均可抑制积雪草苷对NE预收缩血管环的舒张作用（P<0.05）。在无钙条件下，血管环经KCl、NE作用，积雪草苷能抑制CaCl₂导致外钙内流、内钙释放引起的收缩（P<0.01）。结论 积雪草苷通过介导高电导钙激活性钾离子通道开放、促进内皮细胞一氧化氮释放并调节钙离子内外流诱导大鼠胸主动脉舒张，从而降低大鼠收缩压。
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  缓释地塞米松改性丝胶蛋白水凝胶支架促进大鼠下颌骨缺损修复：基于调节巨噬细胞M2极化

  范毅平, 罗梦琳, 黄东宗, 刘琳, 傅博, 王潇宇, 关淼升, 李鸿波

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 533-540.

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  目的 探究改性丝胶蛋白水凝胶（SMH-CD/DEX）调节巨噬细胞极化促进骨缺损修复的能力。方法 将地塞米松搭载于丝胶蛋白水凝胶构建SMH-CD/DEX水凝胶。通过扫描电镜、傅里叶红外光谱、细胞活性实验和释放曲线测定，对SMH-CD/DEX水凝胶的形貌、化学性质及生物活性进行表征分析。通过Western blot、RT-qPCR、流式细胞术检测THP-1巨噬细胞中iNOS和Arg-1蛋白表达量，IL-6、IL-10、Arg-1、iNOS基因表达水平及CD86、CD206的表达比例。在共培养条件下通过Western blot,RT-qPCR检测h PDLSCs人牙周膜干细胞COL1A1和Runx2蛋白的表达量，ALP、Runx2、OCN、BMP2基因表达量，并进行碱性磷酸酶染色和茜素红染色。在大鼠下颌骨骨缺损模型植入水凝胶，通过Micro-CT扫描和组织病理染色分析新骨形成情况。结果 通过主客体相互作用与化学偶联改性丝胶蛋白水凝胶，成功构建SMH-CD/DEX水凝胶。SMH-CD/DEX水凝胶能够有效提高巨噬细胞M2极化相关标志物的IL-10及Arg-1的表达量（P<0.001）；并降低M1极化相关标志物IL-6及iNOS表达（P<0.001）。在共培养体系中，SMH-CD/DEX水凝胶可提高人牙周膜干细胞的成骨分化相关标志物ALP、BMP2(P<0.05)及COL1A1(P<0.001)、Runx2表达量（P<0.01）。碱性磷酸酶染色和茜素红染色结果显示，SMH-CD/DEX水凝胶能够有效促进人牙周膜干细胞成骨分化。Micro-CT及HE、Masson染色结果显示，SMH-CD/DEX水凝胶有效促进骨缺损再生修复（P<0.05）。结论 SMH-CD/DEX水凝胶能够调节巨噬细胞M2极化促进干细胞成骨分化并促进骨缺损愈合。
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  高表达LINC00626通过JAKl/STAT3/KHSRP信号轴促进食管胃结合部腺癌转移的恶性进展

  张锋, 范林林, 康霞, 韦海涛, 李丽

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 541-552.

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  目的 探究LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控食管胃结合部腺癌的恶性进展及分子机制。方法 收集并比较食管胃结合部腺癌组织和癌旁组织LINC00626、KHSRP的表达水平。qRT-PCR法检测食管腺癌细胞系（OE-19、TE-7、BIC-1、FLO-1、SK-GT-4、BE-3）与正常食管上皮细胞系（Het-1A）中LINC00626、KHSRP的表达差异。利用慢病毒试剂，构建稳定敲降LINC00626的OE-19、TE-7细胞和稳定过表达LINC00626的FLO-1、SK-GT-4。取对数生长期OE-19细胞分为sh-NC组（转染LV3-NC慢病毒）、sh-LINC00626组（转染敲降LINC0062慢病毒），TE-7细胞同上分组；取对数生长期FLO-1细胞分为Vector组（转染LV6-NC慢病毒）、INC00626组（转染过表达LINC0062慢病毒），SK-GT-4细胞同上分组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)、Transwell迁移/侵袭实验检测敲降和过表达LINC00626后对食管腺癌细胞增殖、迁移、侵袭能力。裸鼠皮下成瘤实验、肺转移实验检测敲降和过表达LINC006266在活体动物体内的作用。Western blot实验检测敲降和过表达LINC00626后KHSRP和JAK/STAT通路蛋白的表达情况。结果 LINC00626和KHSRP在食管胃结合部腺癌组织和食管腺癌细胞中表达量显著升高（P<0.05）。敲降LINC00626后，体内和体外食管腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭水平显著下降（P<0.01），过表达LINC00626后则效果反之（P<0.01）。在敲降LINC0626后，JAK/STAT信号通路中JAK1、STAT3磷酸化水平明显降低（P<0.05），过表达LINC00626后情况则反之（P<0.05）。结论 LINC00626通过JAK1/STAT3/KHSRP信号轴调控食管胃结合部腺癌转移的恶性进程。
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  心脏磁共振成像对急性ST段抬高型心肌梗死后左心室不良重构的预测价值

  崔佳宁, 刘文佳, 闫非, 赵亚男, 陈伟杰, 罗春材, 张兴华, 李涛

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 553-562.

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  目的 评估心脏磁共振（CMR）对ST段抬高型心肌梗死（STEMI）后左心室不良重构的价值。方法 回顾性分析86例STEMI患者经皮冠状动脉介入术后1周及5个月的临床资料和CMR图像。所有受试者均采集电影和LGE序列。将患者分为左心室不良重构组（n=25）和无左心室不良重构组（n=61）。左心室不良重构定义为第2次CMR检查时左心室收缩末期容积（LVESV）较初始CMR增加15%或更多。CMR分析包括左心室容积、心肌梗死特征、整体和区域心肌功能。采用Logistic回归法分析左心室不良重构的独立预测因素。结果 在初始CMR时，两组患者的左心室容积及左心室射血分数（LVEF）差异均无统计学意义（P>0.05），但左心室不良重构组梗死质量百分比[（34.07±10.04）%vs（22.20±11.29）%,P<0.001]和微血管阻塞（MVO）质量百分比[1.9（0, 3.8）%vs 0（0, 1.06）%,P<0.001]明显大于无左心室不良重构组。随时间推移，两组患者的心肌损伤和心功能均有恢复。但在第2次CMR时，左心室不良重构患者有更低的LVEF [（42.01±9.51）%vs（55.23±10.04）%,P<0.001]、更大的左心室收缩末期容积指数[55.58（43.15,69.91）mL/m2 vs 35.79（26.70,45.04）mL/m²,P<0.001]和梗死质量百分比[（26.71±24.51）%vs（17.08±9.25）%,P<0.001]。左心室不良重构组整体峰值应变及应变率、梗死区峰值应变、径向和周向峰值应变率更小（均P<0.05）。多因素分析显示，只有3个因素是左心室不良重构的独立预测因素，其中梗死质量百分比预测左心室不良重构的AUC为0.793（95%CI 0.693～0.873），截断值为30.67%；整体径向舒张期峰值应变率的AUC为0.645（95%CI 0.534～0.745），截断值为0.58%；肾素血管紧张素醛固酮系统（RAAS）抑制剂的AUC为0.699（95%CI 0.590～0.793）。结论 在急性期，左心室不良重构组和无左心室不良重构患者的左心室容积、整体及节段的心功能没有显著差异；但随时间推移，左心室不良重构组的左心室容积明显变大，整体及节段的心功能明显更差。梗死质量百分比、径向舒张期峰值应变率及RAAS抑制剂是左心室不良重构的独立预测因子。
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  CaMKⅡγ和CaMKⅡδ通过PI3K/Akt/Erk信号通路减轻小鼠神经元缺血再灌注损伤

  刘昊铭, 林子诗, 叶靖

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 563-570.

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  目的 观察钙/钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ（CaMKⅡ）的同工型CaMKⅡγ和CaMKⅡδ对鼠神经元细胞缺血缺氧再灌注损伤的影响，并探究其作用机制。方法 分离胚胎期第18天胎鼠大脑用于提取原代神经元，在5%CO2、37℃条件下培养，分为常规培养的对照组、空白对照组（si-NT）、CaMKⅡγ敲除组（si-CAMK2G）和CaMKⅡδ敲除组（si-CAMK2D）。研究组神经元转染处理后，更换为无糖培养基，并将其置于缺氧环境中模拟氧糖剥夺（OGD/R）条件，持续1 h，随后复原标准培养环境。通过对神经元裂解物行免疫蛋白印迹检测磷脂酰肌醇-3-激酶/细胞外信号调节激酶（PI3K/Akt/Erk）信号通路构件的表达量，并建立小鼠大脑中动脉闭塞（MCAO）模型，通过对比假手术组（Sham）(n=25)和MCAO组（n=25）PI3K/Akt/Erk信号通路表达来进行验证。结果si-CAMK2G组的胎鼠神经元细胞在OGD/R 12、24、48、72 h的生存率明显低于si-NT组（P<0.01或0.001），并可逆转OGD/R介导的胎鼠神经元细胞CaMKⅡγ表达上调。si-CAMK2G组和si-CAMK2D组与si-NT组相比，PI3K/Akt/Erk信号通路表达受到明显抑制（P<0.01）。在MCAO模型中，MCAO组小鼠脑CaMKⅡδ和CaMKⅡγ的表达显著增加并激活了PI3K/Akt/Erk信号通路，CaMKⅡδ和CaMKⅡγ,Erk、磷酸化Erk、Akt和磷酸化Akt在MCAO造模成功再灌注后24、48、72和96 h的表达显著高于Sham组再灌注24 h(P<0.05,0.01或0.0001)。结论 CaMKⅡγ和CaMKⅡδ在神经元细胞发生缺血缺氧损伤时的神经保护作用可能是通过PI3K/Akt/Erk信号通路介导的。
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  miR-132-3p/CAMTA1对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠施万细胞的调控作用

  朱瑾, 欧阳欣, 刘屿, 钱叶梅, 夏斌, 施延安, 俞力夫

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 571-577.

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  目的 探讨miR-132-3p通过钙调素结合转录因子1(CAMTA1)对I-125粒子处理的面神经损伤大鼠（FNI）中施万细胞的调控作用。方法 用I-125粒子辐射大鼠施万细胞，并在细胞中转染miR-132-3p mimic、miR-132-3p inhibitor以及sh-CAMTA1。免疫荧光检测S100B和β-TubulinⅢ荧光强度。RT-qPCR检测miR-132-3p的表达，Western blot检测CAMTA1蛋白表达。EdU染色评估细胞增殖，Transwell检测细胞迁移。同时，构建FNI大鼠模型并在大鼠面部植入I-125粒子，HE、LFB染色以及IF染色评估大鼠面神经组织的病理损伤。StarBase v2.0数据库和双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p和CAMTA1的靶向关系。结果S100B和β-TubulinⅢ在大鼠施万细胞中显著表达。I-125粒子辐射组中miR-132-3p表达降低（P<0.001），抑制细胞的增殖（P<0.001）和迁移（P<0.001）。过表达miR-132-3p或敲降CAMTA1显著促进施万细胞的增殖（P<0.001）和迁移（P<0.05），敲降miR-132-3p则具有相反的作用。机制研究显示，miR-132-3p靶向负调控CAMTA1。体内实验结果显示，过表达miR-132-3p通过抑制CAMTA1的蛋白表达，减弱I-125粒子对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。结论 过表达miR-132-3p抑制CAMTA1的表达，促进施万细胞的增殖和迁移，抑制I-125对FNI大鼠面神经损伤的促进作用。
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  miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

  黄秋虎, 周建, 王子珍, 杨堃, 陈政纲

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 578-584.

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  目的 探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法 运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况；生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制；将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组，采用Western blotting检测CREB1的表达变化，采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响，采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响，采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响，采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果 miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低（P<0.05），而CREB1的表达则逐渐增加，差异有统计学意义（P<0.05）；双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB1 3′UTR表达载体的荧光素酶活性，CREB1是miR-26b-3p下游靶基因。抑制miR-26b-3p表达可上调CERB1的表达，进而抑制细胞凋亡，促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。过表达miR-26b-3p可下调CERB1的表达，促进细胞凋亡，抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭（P<0.05）。结论 miR-26b-3p可靶向调控CREB1的表达调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖、迁移和侵袭，进而参与胶质瘤的发生发展。
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  基于多模态多示例学习的免疫介导性肾小球疾病自动分类方法

  龙楷兴, 翁丹仪, 耿舰, 路艳蒙, 周志涛, 曹蕾

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 585-593.

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  目的 探讨如何利用多模态深度学习方法，联合光学显微镜（OM）、免疫荧光显微镜（IM）及透射电子显微镜（TEM）对应的3种图像进行免疫介导性肾小球疾病分类。方法 基于273例患者的病理图像进行回顾性研究，构建多模态多示例模型对3种免疫介导性的肾小球疾病——免疫球蛋白A肾病（IgAN）、膜性肾病（MN）、狼疮性肾炎（LN）进行分类。该模型采用示例水平的多示例学习（I-MIL）方法挑选患者的TEM图像并与同一患者的OM图像和IM图像进行多模态特征融合。通过该模型与单模态、双模态模型的比较，探究3种模态之间的不同组合形式以及模态特征融合方式的特性。结果 联合OM、IM以及TEM图像建立的多模态多示例模型准确率为（88.34±2.12）%，优于准确率为（87.08±4.25）%的最优的单模态模型，以及准确率为（87.92±3.06）%的最优的双模态模型。结论 本研究成功建立基于OM、IM及TEM三种模态图像的多模态多示例模型，并验证了采用多示例学习结合多模态学习方法对免疫介导性肾小球疾病分类的有效性。
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  连翘配方颗粒与饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌效果的比较研究

  郭新邓, 郭卓琳, 孙冬梅, 邹丽芳, 区锦莹, 余林中, 卢子滨, 曹惠慧, 刘俊珊

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 594-604.

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  目的 采用斑马鱼体内模型实验和体外抗菌实验比较连翘配方颗粒和饮片的抗炎、抗肿瘤和抑菌的药效差异。方法 将斑马鱼胚胎分为空白组、模型对照组、10μg/mL地塞米松处理组、连翘饮片处理组（剂量为400、600、800μg/mL）和连翘配方颗粒处理组（剂量为400、600、800μg/mL），分别构建硫酸铜、尾鳍横断和LPS显微注射斑马鱼炎症模型，采用中性粒细胞观察、病理组织切片、生存分析和实时定量荧光PCR实验评价连翘配方颗粒与饮片的抗炎药效差异，并从MAPK和NF-κB信号通路角度探讨其抗炎作用机理差异。将斑马鱼胚胎分为模型对照组、250 nmol/L索拉菲尼处理组、连翘饮片处理组（400、600、800μg/mL）和连翘配方颗粒处理组（400、600、800μg/mL），采用斑马鱼异种移植肿瘤细胞模型，通过荧光观察和病理组织切片评价连翘配方颗粒与饮片抗肿瘤的药效差异。将实验分为空白组、连翘饮片处理组（1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL）和连翘配方颗粒处理组（1.95、3.91、7.81、15.63、31.25、62.5、125、250、500 mg/mL），采用微量肉汤稀释法评价连翘配方颗粒与饮片的抑菌药效差异。结果 与模型对照组比较，连翘配方颗粒及饮片均可抑制中性粒细胞聚集数量（P<0.001）和Tnfα、Il6、P38、Jnk、Erk和P65的mRNA表达（P<0.05或P<0.01或P<0.001），升高斑马鱼的存活率（P<0.01或P<0.001）；减少人肺腺癌A549细胞、人结直肠癌HCT116细胞、人胰腺癌PANC-1细胞、人肝癌Hep3B细胞和人宫颈癌Hela细胞在卵黄囊内的聚集（P<0.05或P<0.01或P<0.001）；并在15.63 mg/mL时起到抑菌作用。结论 连翘配方颗粒及饮片均具有显著抗炎、抗肿瘤和抑菌作用，两者除在低剂量下抑制Il6、P65、Jnk的m RNA表达和HCT116细胞增殖有显著性差异外，其他作用均无明显差异。
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  基于GEO数据库筛选胃癌差异表达基因及其功能和通路富集分析

  梁一豪, 赖颖君, 袁燕文, 袁炜, 张锡波, 张拔山, 卢志锋

  南方医科大学学报. 2024, 44(03): 605-616.

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  目的 基于基因表达数据库（GEO）运用生物信息学方法挖掘胃癌诊断和预后相关的核心基因，筛选参与胃癌发生发展的分子靶标。方法 从GEO数据库中下载胃癌基因芯片数据GSE118916、GSE54129和GSE79973，筛选差异表达基因（DEGs）并进行分子功能和信号通路的富集分析，构建蛋白质互作网络（PPI），根据网络节点和位置筛选出核心基因，利用癌症基因图谱（TCGA）中胃腺癌（STAD）的全基因组测序数据对核心基因进行表达水平和诊断预后的验证分析，最后通过qRT-PCR检测核心基因在不同胃癌细胞株中的表达水平。结果 共筛选出77个DEGs，主要位于细胞外基质（ECM）与基底膜，具有氧化还原酶和ECM受体配体活性，参与机体消化和激素代谢等生物学过程，与胃酸分泌、视黄醇和激素代谢等信号通路相关。共获得9个核心基因，其中SPARC、TIMP1、THBS2、COL6A3和THY1在胃癌中表达上调（P<0.05）；而TFF1、GKN1、TFF2、PGC在胃癌中下调（P<0.05）。生存预后分析显示，SPARC、TIMP1、THBS2、COL6A3、TFF2、THY1的异常表达与胃癌患者的生存时间显著相关；ROC曲线显示，TIMP1、SPARC、THY1、THBS2对胃癌有较高的诊断价值；在胃癌患者的病理组织中SPARC、TIMP1、THBS2、COL6A3的高表达得到验证；q RT-PCR检测发现，核心基因在不同的胃癌细胞株中不尽相同，但表达趋势基本符合。结论 SPARC、TIMP1、THBS2等DEGs可能与胃癌的发生发展有关，可能作为潜在的候选分子标志物，用于胃癌的早期诊断和预后判断。