2024年, 第44卷, 第01期　
刊出日期：2024-01-20

  

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  过表达lncRNA HEM2M改善非酒精性脂肪肝病小鼠的肝脏损伤

  孔祥, 张腾, 张妍, 高灵犀, 汪文, 汪梦燕, 王国栋, 吕坤

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 1-8.

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  目的 探讨过表达长链非编码RNA(lncRNA)HEM2M对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）小鼠肝损伤的影响。方法 野生型C57BL/6(WT)和条件性髓系细胞lncRNA HEM2M过表达（MYKI）小鼠分别喂饲普通饮食（ND）和高脂饮食（HFD），即为WT+ND、MYKI+ND、WT+HFD和MYKI+HFD组。12周后行腹腔糖耐量及胰岛素耐量试验后处死小鼠，检测小鼠血清和肝脏组织的肝功能指标，制备肝脏组织切片后行HE染色和F4/80免疫组化染色，ELISA法检测肝脏组织中IL-6、IL-1β和TNF-α水平，qRT-PCR检测M1型（TNF-α、i NOS和IL-6）和M2型（Arg-1、YM-1和IL-10）巨噬细胞标志物mRNA表达，免疫印迹检测肝脏组织中P-AKT、T-AKT、NLRC4、caspase-1和GSDMD蛋白表达，比色法和免疫荧光测定肝脏组织caspase-1活性。结果 与HFD喂饲的WT小鼠相比，MYKI+HFD小鼠肝功能损伤减轻（P<0.01），肝脏脂肪变缓解，肝脏巨噬细胞浸润减少，糖耐量损伤及胰岛素抵抗改善（P<0.01）;MYKI+HFD小鼠肝脏组织IL-6、IL-1β和TNF-α水平降低（P<0.01）,M1型巨噬细胞标志物mRNA表达减少（P<0.01）,M2型mRNA表达增加（P<0.01）;MYKI+HFD小鼠肝脏组织NLRC4炎症小体活性降低（P<0.01），活性caspase-1减少，GSDMD-N蛋白表达降低（P<0.05）。结论 过表达lncRNA HEM2M降低NAFLD小鼠肝脏炎症因子水平，进而改善胰岛素抵抗并抑制肝脏NLRC4炎症小体激活，减少肝细胞焦亡，最终改善NAFLD小鼠肝脏损伤。
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  RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移、侵袭和糖酵解

  颜秋霞, 曾鹏, 黄树强, 谭翠钰, 周秀琴, 乔静, 赵晓英, 冯玲, 朱振杰, 张国志, 胡鸿, 陈彩蓉

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 9-16.

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  目的 探讨X连锁RNA结合基序蛋白（RBMX）对膀胱癌细胞（1376细胞和UC-3细胞）的增殖、迁移、侵袭的影响以及其在糖酵解中的作用。方法 采用慢病毒表达系统和siRNA干扰技术，分别构建RBMX过表达和敲低的膀胱癌细胞模型（1376细胞和UC-3细胞）。采用RT-qPCR和Western blotting分别在m RNA水平和蛋白水平上检测细胞模型是否构建成功。通过EdU增殖实验和克隆形成实验检测过表达和敲低RBMX后细胞的生长和集落形成能力，同时通过Transwell实验分析过表达和敲低RBMX后对细胞迁移、侵袭能力的影响；随后，采用Western blotting检测过表达和敲低RBMX后糖酵解关键蛋白PKM1(M1型丙酮酸激酶)和PKM2(M2型丙酮酸激酶)的表达变化；最后，利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒分析过表达和敲低RBMX对膀胱癌细胞糖酵解的影响。结果 RT-qPCR和Western blotting结果显示，过表达RBMX膀胱癌细胞的mRNA和蛋白表达水平显著高于阴性对照组（P<0.05），敲低RBMX膀胱癌细胞的m RNA和蛋白表达水平显著低于阴性对照组（P<0.05）。过表达RBMX明显抑制膀胱癌细胞的增殖、克隆形成、迁移和侵袭，敲低RBMX则作用相反。Western blotting实验结果显示，过表达RBMX使PKM1表达上升，PKM2表达下降，敲低RBMX则作用相反。葡萄糖消耗及乳酸生成实验表明，过表达RBMX均能抑制膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成（P<0.05），敲低RBMX均能促进膀胱癌细胞葡萄糖消耗及乳酸生成（P<0.05）。结论 RBMX通过下调PKM2抑制膀胱癌的发生发展和糖酵解能力，有望成为膀胱癌诊断和治疗的潜在分子靶标。
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  过表达LncRNA MEG3通过促进铁死亡增强肝癌细胞对顺铂的化疗敏感性

  朱权, 黄柏胜, 位磊艳, 罗奇志

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 17-24.

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  目的 探讨过表达LncRNA MEG3对肝癌细胞HepG2和LM3增殖、迁移和顺铂化疗敏感性的影响及机制。方法 生物信息学在线网站分析MEG3在健康人群与肝细胞癌（HCC）患者的表达情况；将HepG2和LM3细胞各自分成2组，NC组：转染pcDNA3.1(+)空载体的细胞；MEG3-OE组：转染pcDNA3.1(+)-MEG3质粒的细胞。另外在检测活性氧（ROS）和丙二醛（MDA）实验中，将上述两组细胞分别各自给予顺铂（DDP）或铁死亡抑制剂Fer-1处理，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测细胞中MEG3的表达；CCK8和划痕实验检测肝癌细胞的增殖和迁移；另外采用CCK8实验检测DDP对肝癌细胞的抑制率；活性氧荧光探针（DCFH-DA）检测肝癌细胞中ROS的表达，MDA试剂盒检测肝癌细胞中MDA的浓度；Western blotting实验检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)和铁蛋白重链1(FTH1)的蛋白表达水平。结果 MEG3在肝癌细胞中的表达显著低于LO2细胞，与生物信息学分析结果一致（P<0.05）；与阴性对照组相比，MEG3-OE组肝癌细胞增殖迁移能力降低（P<0.05）、DDP的抑制率增高（P<0.05）、ROS水平升高、MDA表达水平升高（P<0.05）;MEG3-OE组肝癌细胞GPX4和FTH1蛋白表达均显著降低。结论 肝癌细胞中LncRNA-MEG3表达降低，过表达MEG3可抑制肝癌细胞增殖与迁移，增强DDP的化疗敏感性，其机制与促进肝癌细胞铁死亡有关。
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  沉默PDCD4表达可减轻脓毒症血管内皮细胞损伤：基于改善线粒体动力学

  于佳池, 李芮冰, 夏天, 王佳楠, 金家丞, 袁漫秋, 李绵洋

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 25-35.

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  目的 探究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)在缓解脓毒症血管内皮细胞损伤中的作用机制。方法 通过体外分别培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）和小鼠血管内皮细胞（C166）并给予脂多糖（LPS）处理，建立脓毒症血管内皮损伤细胞模型。分别设立对照组（NC）、LPS诱导组（NC+LPS）、si-PDCD4转染组（si-PDCD4）、si-PDCD4转染后LPS诱导组（si-PDCD4+LPS）、si-PDCD4转染后LPS诱导加线粒体分裂激动剂（FCCP）组（si-PDCD4+LPS+FCCP）。通过LC-MS/MS技术，分析PDCD4敲低前后蛋白组学变化。通过RT-PCR检测对照组和LPS组转染前后PDCD4、细胞炎症、凋亡以及线粒体分裂融合相关基因的mRNA表达量的变化；蛋白质印迹法检测线粒体分裂融合关键蛋白FIS1、DRP1和OPA1的表达水平；通过激光共聚焦技术观察JC-1、MitoSOX探针荧光强度以检测线粒体膜电位和线粒体活性氧变化。结果 与对照组相比，LPS组炎症相关指标白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子（TNF-α）和单核细胞趋化蛋白1(MCP1)基因的mRNA表达升高（P<0.05）;PDCD4在脓毒症血管内皮细胞损伤中高表达（P<0.05）；蛋白组学分析结果表明，PDCD4敲低与线粒体动力学存在相关性；Western blot结果表明与对照组相比，LPS组诱导线粒体分裂蛋白FIS1、DRP1表达增加，融合蛋白OPA1减低（P<0.05）;MitoSOX和JC-1荧光探针结果提示LPS诱导下内皮细胞线粒体发生氧化应激，膜电位显著降低（P<0.05），敲减组的氧化应激和线粒体膜电位有所缓解。PDCD4敲减后的保护效应可被线粒体分裂激动剂FCCP逆转。敲减PDCD4后能够抑制LPS所引起的炎症和氧化应激水平，线粒体分裂和融合指标恢复平衡。结论 沉默PDCD4基因通过调控线粒体的动力学维持线粒体功能正常，减轻氧化应激，从而有利于缓解脓毒症血管内皮细胞损伤。
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  多囊卵巢综合征与牙周炎呈正相关：一项前瞻性研究

  胡当立, 张锋, 李蕙君, 许小艺, 文萍, 郑峥, 姚吉龙

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 36-44.

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  目的 探讨细胞因子水平、性激素水平和代谢相关指标与多囊卵巢综合征（PCOS）和牙周炎之间相互作用和疾病进展的关系。方法 招募了2021年10月～2022年12月在我院就诊的健康受试者20例和PCOS患者40例。分别在首次入组时、入组后3月和6月进行全口牙周检查、问卷信息采集以及血清和唾液样本收集。通过全口牙周检查获得全口菌斑积分(FMPS)、探诊时牙龈出血率（BOP）、牙周袋深度（PD）、临床附着水平（CAL）、PD≥4 mm、PD≥6 mm的位点率以及CAL数值在1～2 mm和3～4 mm占全口牙中的位点率等牙周参数。通过信息采集获得血清黄体生成素/卵泡刺激素(LH/FSH)、血清总睾酮（T）、血清催乳素（PRL）、孕酮（P）和雌二醇（E2）等数值。检测血清和唾液样本中的白介素6(IL-6)、IL-17A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶8(MMP-8)这4种细胞因子的水平。根据牙周检查情况把受试者分为非牙周炎非PCOS受试者（A）组（n=15）、非牙周炎PCOS受试者（B）组（n=28）、牙周炎非PCOS受试者（C）组（n=5）和患有牙周炎的PCOS受试者（D）组（n=12）。通过组间差异性分析、广义估计方程、Spearman相关性分析探讨这些指标与牙周炎和PCOS的关系。结果 LH/FSH的比值在B组和D组均高于A组（P<0.05）,D组明显高于C组（P<0.05）。B组的血清MMP-8水平高于A组（P<0.05）。而C组和D组的唾液MMP-8水平都明显高于A组（P<0.05）,D组也明显高于B组（P<0.05）。PD、BOP、PD≥4 mm位点率和CAL在1～2 mm的位点率在C组和D组均明显高于A组（P<0.05）和B组（P<0.05）。入组6个月后的唾液MMP-8、LH、LH/FSH、血清和唾液的IL-6、PD、PD≥4 mm和CAL=1～2 mm的位点率与首次入组时水平相比均呈上升趋势（OR值>1,P<0.05）。在随访期间，非PCOS组（A+C）和PCOS组（B+D）相比，血清IL-6水平有统计学差异；血清IL-6、唾液MMP-8、PD、BOP、PD≥4 mm的位点率和CAL在1～2 mm的位点率在非牙周炎组（A+B）与有牙周炎组（C+D）组间有统计学差异。所有受试者的综合Spearman相关性分析提示：LH和LH/FSH与PD呈正相关（P<0.05）；血清总睾酮和LH/FSH与血清MMP-8水平也呈正相关（P<0.05）;PD、BOP、FMPS、PD≥4 mm位点率和CAL在1～2 mm位点率与唾液MMP-8均呈正相关（P<0.01）。结论 PCOS和牙周炎存在相关性，且这两种疾病的进展可改变血清和唾液中的促炎细胞因子和血清性激素水平。
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  白藜芦醇可减轻高糖诱导的心肌细胞肥大：基于促进SSIIRRTT1表达维持线粒体稳态

  叶红伟, 张钰明, 云琦, 杜若丽, 李璐, 李玉萍, 高琴

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 45-51.

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  目的 探讨白藜芦醇是否通过促进沉默信息调节因子2同源体1(SIRT1)表达调控线粒体稳态，减轻高糖诱导的H9c2心肌细胞肥大。方法 将对数生长的H9c2心肌细胞随机分为4组：正常糖浓度组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+白藜芦醇组（HG+RES组）、高糖+白藜芦醇+SIRT1基因干扰组（HG+RES+si-SIRT1组）。各组细胞培养72 h后，检测细胞超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛（MDA）含量，检测细胞活性氧（ROS）水平，计算细胞相对面积，检测心房利钠因子（ANF）和脑钠肽（BNP）mRNA表达，SIRT1蛋白、线粒体融合相关蛋白视神经萎缩蛋白1(OPA1)和线粒体融合蛋白2(MFN2)、线粒体分裂相关蛋白线粒体动力相关蛋白1(DRP1)和线粒体分裂蛋白1(FIS1)以及线粒体自噬相关蛋白BNIP3L和LC3的表达。结果 与NG组相比，HG组心肌细胞SOD活力降低（P<0.01）,MDA含量和ROS水平升高，细胞相对面积增加，ANF和BNP mRNA表达增加，SIRT1、OPA1、MFN2和BNIP3L蛋白表达降低，LC3-II/LC3-I比值降低，DRP1和FIS1蛋白表达增高（P<0.01）；与HG组相比，HG+RES组SOD活力升高，MDA含量和ROS水平降低，细胞相对面积减少，ANF和BNP mRNA表达下降，SIRT1、OPA1、MFN2和BNIP3L蛋白表达增高，LC3-II/LC3-I比值增高，DRP1和FIS1蛋白表达降低（P<0.05）；与HG+RES组相比，HG+RES+si-SIRT1组SOD活力降低，MDA含量和ROS水平升高，细胞相对面积增加，ANF和BNP mRNA表达增加，SIRT1、OPA1、MFN2、BNIP3L蛋白表达降低，LC3-II/LC3-I比值降低，DRP1和FIS1蛋白表达增高（P<0.05）。结论 白藜芦醇可通过减少ROS积累减轻氧化应激损伤抑制高糖诱导的H9c2心肌细胞肥大，其机制可能与促进SIRT1蛋白表达、调节线粒体融合分裂平衡、促进BNIP3L介导的线粒体自噬从而调控线粒体稳态相关。
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  高良姜素通过下调lncRNA H19的表达抑制ox-LDL诱导的人源正常主动脉内皮细胞血管生成活性

  罗瑞, 田龙海, 杨永曜

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 52-59.

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  目的 探索高良姜素对ox-LDL诱导的人源正常主动脉内皮细胞（HAECs）的影响及其机制。方法 使用不同浓度（0、10、20、40、80μmol/L）的高良姜素孵育HAECs 24 h后，通过MTT检测细胞活性。以5 mg/mL ox-LDL诱导的HAECs为模型，使用20、40μmol/L高良姜素孵育24 h。为观察高良姜素的作用机制，在HAECs中过表达lncRNA H19，使用40μmol/L高良姜素孵育24 h。通过qRT-PCR检测lncRNA H19的水平，划痕实验和血管形成实验用于观察迁移和管形成能力，使用流式细胞术检测ROS水平。通过Western blot检测VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平。结果 低浓度（0、10、20、40μmol/L）的高良姜素对细胞无明显毒性（P>0.05），而80μmol/L高良姜素会抑制HAECs细胞的活性（P<0.01）。ox-LDL诱导的HAECs中lncRNA H19的表达水平增加，高良姜素能降低ox-LDL诱导的HAECs的lncRNA H19的表达水平、迁移能力和血管形成能力，ROS水平以及VEGFA、MMP-2、MMP-9的蛋白水平（P<0.01）。但是，高良姜素的这些生物学作用均能被过表达lncRNA H19逆转（P<0.01）。结论 高良姜素可能通过抑制lncRNA H19的表达以降低ox-LDL诱导的HAECs的迁移、氧化应激和血管形成能力来发挥治疗动脉粥样硬化的潜力。
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  桔梗素D通过下调成纤维细胞TRPC6表达改善小鼠肺纤维化

  梁梓琛, 余常辉, 梁世秀, 周梓聪, 周子丽, 孟晓静, 邹飞, 蔡绍曦

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 60-69.

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  目的 探究桔梗素D(PD)对肺纤维化的影响及其机制。方法 博来霉素（BLM）气道内滴入构建C57BL/6J小鼠肺纤维化模型，再予PD(10 mg/kg)灌胃，28 d后处死小鼠。分组如下：对照组（control）、BLM(10 mg/kg)模型组、BLM(10 mg/kg)+PD(10 mg/kg)组。肺组织石蜡切片HE染色、免疫组化和天狼星红染色评估小鼠肺组织纤维化程度和瞬时受体电位离子通道亚族C成员6(TRPC6)的表达与分布。Western blot检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。小鼠原代肺成纤维细胞体外培养，分别用PD、TRPC6抑制剂醋酸落叶松酯（LA）预处理后加入转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激细胞，根据加入的TGF-β1和PD浓度不同分组如下：control组、TGF-β1(10 ng/mL)组、PD(2.5μmol/L)+TGF-β1组、PD(5μmol/L)+TGF-β1组和PD(10μmol/L)+TGF-β1组，LA处理分组如下：control组、TGF-β1(10 ng/mL)组和LA(10μmol/L)+TGF-β1组，测定细胞存活率、collagenⅠ、α-SMA和TRPC6的表达水平、活性氧（ROS）生成水平、线粒体膜电位、细胞增殖能力等指标。利用网络药理学方法结合文献分析PD作用于肺纤维化可能通过的机制。结果 PD可明显减轻BLM诱导小鼠模型的肺部纤维化程度、减少α-SMA表达（P<0.05）。CCK-8结果显示PD、TGF-β1和LA的最适宜刺激浓度分别是10μmol/L、10 ng/mL和10μmol/L;5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）染色结果显示PD能够有效抑制肺成纤维细胞增殖；2,7-二氯荧光素二乙酸酯（DCFH-DA）染色显示PD能有效减少TGF-β1诱导的细胞ROS生成（P<0.0001）；线粒体膜电位检测（Jc-1染色）结果显示PD能有效缓解TGF-β1诱导的细胞线粒体膜电位下降（P<0.001）；蛋白电泳结果显示PD能显著抑制TGF-β1诱导的α-SMA和collagenⅠ的表达（P<0.05）。网络药理学结合文献分析发现PD可能通过TRPC6作用于肺纤维化。免疫组织化学结果显示PD明显减轻了BLM诱导的肺组织TRPC6表达。蛋白电泳结果显示PD可明显抑制TGF-β1诱导的TRPC6表达（P<0.05）；使用LA可明显抑制细胞TRPC6、α-SMA、collagenⅠ的表达（P<0.05）。结论 PD可降低小鼠肺纤维化，其机制可能与下调TRPC6并减少ROS产生有关。
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  TTC9A在泛癌中的表达水平与多种癌症的预后和免疫微环境相关

  姚倚钠, 刘佳, 周想军, 刘泽宇, 邱士珍, 何颖政, 周雪琼

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 70-82.

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  目的 确定四肽重复蛋白9A(TTC9A)在泛癌中的基因表达及其预后价值，明确其与免疫浸润的关系。方法 R语言分析癌症基因组图谱及GTEx网站中TTC9A在不同肿瘤组织与正常组织中的表达及其与各种癌症的预后、DNA甲基化、肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性的关系；应用TIMER和x Cell比较TTC9A表达与免疫浸润的关系；运用免疫印迹法与RT-qPCR检测TTC9A在4种癌症中的表达情况。结果 生信结果显示与正常组织相比，TTC9A在多种肿瘤中mRNA表达水平升高，少数肿瘤中下调（P<0.05）。实验结果显示在肺癌、结肠癌和肝癌中，TTC9A的蛋白和mRNA水平均较正常细胞高，与泛癌分析结果一致；而在膀胱癌细胞系中的表达下降，与泛癌分析结果相反。在头颈鳞状细胞癌、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌、低级别胶质瘤、恶性间皮瘤、子宫内膜癌等肿瘤中，TTC9A的高表达与更好的总生存期、疾病特异性生存期、无进展间期密切相关（P<0.05）；而在肺腺癌、胰腺癌、肾上腺癌、直肠腺癌中，高表达TTC9A与更差的总生存期、疾病特异性生存期、无进展间期密切相关（P<0.05）。在多形成性胶质细胞瘤、低级别胶质瘤、葡萄膜黑色素瘤、卵巢浆液性囊腺癌中，TTC9A高甲基化患者预后较好（P<0.05）；但是，在宫颈鳞状细胞癌和宫颈内腺癌、头颈部鳞状细胞癌、肺鳞状细胞癌、肾上腺癌、子宫内膜癌中，TTC9A高甲基化患者预后较差（P<0.05）。TTC9A基因表达分别与7种和4种癌症类型的TMB和MSI显著相关（P<0.05）。在大多数癌症类型中，TTC9A与免疫细胞的浸润水平显著相关（P<0.05），尤其B细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和树突状细胞。结论 TTC9A可作为多种癌症的预后标志物，且与肿瘤突变负荷、微卫星不稳定性和免疫细胞浸润密切相关。
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  多期相CT合成辅助的腹部多器官图像分割

  黄品瑜, 钟丽明, 郑楷宜, 陈泽立, 肖若琳, 全显跃, 阳维

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 83-92.

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  目的 提出并探讨使用多期相CT合成辅助腹部多器官分割方法。方法 提出多期相CT合成辅助腹部多器官分割，多期相CT能够充分提供同一器官不同的图像细节，从而为分割模型提供充分的全面的语义信息，提升腹部多个器官分割的性能。提出基于多头自注意力感知的多期相CT合成方法，引入基于多头自注意力机制的Transformer模块，提升合成网络捕捉长距离语义信息的能力，扩大网络的感受野，并且引入感知损失，在特征层面对合成图像与真实图像特征之间的差异最小化，与Transformer模块有协同作用，从而合成出更清晰、更高质量的多期相CT图像。结果 使用南方医院的多期相CT数据集训练模型。其中用526例多期相CT训练合成模型，利用动脉期增强动脉CT(A.CECT)合成出平扫CT(NECT)、静脉期CECT(V.CECT)、延迟期CECT(D.CECT)的平均最大化绝对误差（MAE）分别为19.192±3.381、20.140±2.676、22.538±2.874，结合统计学对比，本文方法优于对比的其他图像合成方法（P<0.05）。多期相CT合成辅助的腹部多器官分割方法验证在内部验证集上进行验证平均Dice系数（DSC）为0.847，在外部验证集上进行验证平均DSC为0.823。结论 本文方法能够合成出高质量的多期相CT图像以有效缓解不同期相CT之间存在的配准无法解决的误差问题，同时提高腹部13器官的分割性能，具有良好的泛化性能。
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  2型炎症对慢阻肺大、小气道支气管舒张反应性的不同影响

  徐桂铃, 龚钊乾, 王珺娆, 马妍妍, 许懋升, 陈美佳, 胡大鹏, 梁健鹏, 赵文驱, 赵海金

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 93-99.

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  目的 探讨2型炎症指标血嗜酸性粒细胞（EOS）和呼出气一氧化氮（FeNO）对慢性阻塞性肺疾病（慢阻肺）患者支气管舒张反应性（BDR）的影响。方法 纳入我院2019年10月～2023年10月临床确诊的389例慢阻肺患者，根据大气道的支气管舒张试验（BDT）分为BDT阳性组（n=197）和BDT阴性组（n=192）、以及小气道舒张试验阳性与否分为最大呼气中期流量（MMEF）阳性组（n=118）和MMEF阴性组（n=271）。再根据吸烟史、血EOS和FeNO水平将慢阻肺患者分为4组：A组：血EOS<300个/μL+FeNO<35 ppb+吸烟史<20包年；B组：血EOS<300个/μL+FeNO<35 ppb+吸烟史≥20包年；C组：血EOS≥300个/μL或FeNO≥35 ppb+吸烟史≥20包年；D组：血EOS≥300个/μL或FeNO≥35 ppb+吸烟史<20包年，分析临床相关指标与BDR的关系。结果 以第1秒用力呼气容积（FEV₁）、用力肺活量（FVC）和MMEF评估的BDR所得的结果一致，均表现为舒张阳性组的平均年龄更小、FeNO水平以及血EOS计数和百分比都更高（P<0.05）。A组患者的FEV₁改善值（P=0.005）和FEV₁改善率（P=0.024）均显著低于D组。B组患者的FEV₁改善值（P=0.001）、FEV₁改善率（P=0.035）和MMEF改善率（P=0.025）也显著低于D组。在所有患者中，年龄和FeNO水平与FEV₁改善值、FEV₁改善率、MMEF改善率有显著关联（P<0.05）。结论 2型炎症指标对慢阻肺大、小气道BDR具有不同的影响，其临床意义值得进一步探讨。
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  电凝法制作C57/BL6J小鼠局灶性脑缺血模型的评价

  康赟赟, 唐东宁, 张健, 夏青

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 100-107.

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  目的 通过改良电凝法制作小鼠局灶性大脑中动脉阻塞（MCAO）模型的方法、筛选适用于模型小鼠的评价指标，为开展脑缺血相关的长期研究提供模型参考。方法 选用C57/BL6J雄性小鼠46只，随机分为模型组（n=34）和对照组（n=12）。采用凝血器永久性凝断小鼠右侧大脑中动脉制备大脑中动脉闭塞模型。通过激光散斑血流成像仪监测造模前、造模后20 min、造模后1 d的脑血流灌注量；通过Longa评分、m NSS评分、平衡木行走实验、圆筒实验、转角实验评价小鼠造模后1、7、14 d的神经功能；采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色测量缺血灶梗死范围，以评估模型是否成功及各指标之间的相关性。Western blotting检测缺血侧皮质中质纤维酸性蛋白（GFAP）、脑源性神经营养因子（BDNF）、双肾上腺皮质激素（DCX）蛋白表达。结果激光散斑血流成像仪监测显示，大脑中动脉电凝灼烧后缺血侧的脑血流量明显降低；与假手术组相比，模型组造模后1、7、14 d的Longa评分和mNSS评分明显升高（P<0.05）；平衡木行走实验结果显示，与假手术组相比，模型组造模后1、7、14 d评分均降低（P<0.05）；圆筒实验结果显示，与术前相比，造模后1、7、14 d模型组的前肢使用不对称性均增加（P<0.05）；转角实验结果显示，与术前相比，造模后1、7、14 d模型组的侧向指数均有提高（P<0.05）。TTC染色显示，假手术组大脑组织无损伤，模型组的梗死灶在手术侧大脑的感觉运动皮层区和尾壳核。Western blotting结果显示，与假手术组相比，模型组缺血侧脑皮层中GFAP的蛋白表达水平呈高表达，模型组1 d(P<0.05)、模型组7 d(P<0.01)、模型组14 d(P<0.01)的GFAP蛋白表达水平升高；DCX的蛋白表达水平在造模后1、7、14 d升高（P<0.05）;BDNF的蛋白表达水平升高，模型组1 d的BDNF蛋白表达水平在缺血后显著升高（P<0.05）。结论 将电凝位置由MCA与大脑下静脉交界的远端位置改为MCA与嗅束交界内侧2 mm段部位可以成功制备小鼠MCAO模型，该模型可用于脑缺血后急慢期神经功能修复机制及神经可塑性等方面的研究。
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  新风胶囊抑制软骨细胞炎症和细胞外基质降解：基于调控miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴

  周巧, 刘健, 万磊, 朱艳, 齐亚军, 胡月迪

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 108-118.

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  目的 探讨新风胶囊（XFC）对白介素（IL）-1β诱导的软骨细胞功能的影响及作用机制。方法 构建IL-1β诱导的软骨细胞炎症模型；SD大鼠灌胃制备XFC含药血清。细胞增殖实验（CCK-8）和流式细胞术筛选最佳XFC含药血清浓度；双荧光素酶报告分析miR-502-5p和TRAF2的靶向关系。构建miR-502-5p抑制表达质粒（inhibitor）及阴性对照组，转染至软骨细胞中。分为对照组（NC）,IL-1β组，XFC组，IL-1β+NC-inhibitor,IL-1β+miR-502-5p inhibitor,IL-1β+miR-502-5p inhibitor+XFC最佳含药血清组，酶联免疫吸附试验（ELASA）检测IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-4、IL-10的水平。逆转录PCR(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹实验（WB）、免疫荧光法检测Ⅱ型胶原α1(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、软骨蛋白聚糖抗体（ADAMTS5）和miR-502-5p/TRAF2/NF-κB基因的表达。结果 与NC组相比，IL-1β组中软骨细胞活力下降，细胞凋亡率升高，且miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降，IL-1β、TNF-α和ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高（P<0.05）。筛选得出20%XFC为最佳含药血清浓度。与IL-1β组相比，XFC含药血清干预后，软骨细胞活力升高，细胞凋亡率下降，IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达下降，miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达升高（P<0.05）。与NC-inhibitor相比，转染miR-502-5p inhibitor后，IL-1β、TNF-α、ADAMTS5、MMP13、TRAF2、NF-κB p65表达升高，miR-502-5p、IL-4、IL-10和COL2A1表达下降；与miR-502-5p inhibitor相比，将miR-502-5p inhibitor转染的软骨细胞和最佳XFC含药血清共培养后，XFC含药血清能逆转miR-502-5p抑制状态对软骨细胞炎症和ECM的影响。结论 XFC抑制软骨细胞炎症、细胞外基质降解，减轻IL-1β诱导的软骨细胞损伤，其机制可能是通过调节miR-502-5p/TRAF2/NF-κB轴。
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  外胚层间充质干细胞来源的外泌体通过控制炎症和氧化损伤减少M1型小胶质细胞并促进H₂O₂处理后PC12细胞的存活

  孙晓鹏, 史航, 张磊, 刘中, 李克威, 钱玲玲, 朱星宇, 杨康佳, 付强, 丁华

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 119-128.

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  目的 探究外胚层间充质干细胞来源的外泌体（EMSCs-exo）对脊髓继发性损伤的潜在修复作用。方法 从大鼠鼻黏膜中分离培养EMSCs，并通过免疫荧光染色鉴定。采用超速离心法获取EMSCs-exo，并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析（NTA）和Western blot进行鉴定。利用差速贴壁法纯化小胶质细胞，并通过免疫荧光染色鉴定。根据BCA法测得的蛋白浓度对EMSCs-exo进行定量分析。设置对照组、含100μg/L脂多糖（LPS）的组和含LPS及37.5 mg/L或75 mg/L EMSCs-exo的组对小胶质细胞进行处理。设置对照组、含400μmol/L H₂O₂的组和含H₂O₂及37.5 mg/L或75 mg/L EMSCs-exo的组对PC12细胞进行处理。通过Western blot和qRT-PCR测定小胶质细胞各组Arg1和iNOS蛋白和mRNA表达量。通过酶联免疫吸附实验测定上清中IL-6、IL-10和IGF-1的浓度。通过CCK-8和Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒检测PC12细胞各组的活力和凋亡情况。结果 免疫荧光染色显示EMSCs高表达标志物Nestin、CD44、CD105、Vimentin。透射电镜显示EMSCs-exo呈典型的杯状结构，NTA显示其平均粒径为142 nm,Western blot显示其表达外泌体标志蛋白CD63、CD81、TSG101，不表达Vimentin。当小胶质细胞在LPS环境中时，75 mg/L的EMSCs-exo能够有效提高其Arg1蛋白量、降低iNOS蛋白量（P<0.05），且相比于37.5 mg/L的浓度，其更能有效提高其Arg1 mRNA水平和IGF-1、IL-10（P<0.05）的生成，降低iNOS mRNA水平和IL-6的生成（P<0.05）；也更有效促进H₂O₂环境中PC12细胞的存活，降低凋亡率（P<0.05）。结论 75 mg/L的EMSCs-exo在体外有效减少M1型小胶质细胞比例，减轻氧化应激下的神经元凋亡，促进神经元存活，因此在控制脊髓继发性损伤中具有一定应用潜能。
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  CPNE3在胃癌中高表达并与患者的预后不良相关

  段婷, 张震, 施金冉, 肖林雨, 杨晶晶, 殷丽霞, 张小凤, 耿志军, 陆国玉

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 129-137.

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  目的 明确CPNE3在胃癌组织中表达情况与患者远期预后的关系，探究其调控胃癌细胞凋亡的作用和分子机制。方法 纳入2013年2月～2017年10月104例于我院行胃癌根治术的患者，通过癌症和肿瘤基因图谱（TCGA）的公共数据和免疫组织化学染色分析CPNE3在胃癌中的表达和对患者肿瘤进展与远期预后的影响。GO富集分析预测CPNE3在胃癌中的生物学功能。采用干扰和过表达CPNE3以及对照慢病毒载体转染MGC803细胞，获取对照组（NC）、敲低组（si-CPNE3）、过表达组（LV-CPNE3）细胞，采用PI3K/AKT抑制剂（LY294002）干预LV-CPNE3组细胞获取LY294002组。流式细胞术分析细胞凋亡，Western blot检测Bax、Cleaved Caspase-3、Bcl-2、p-PI3K和p-AKT表达。结果 TCGA预测分析和免疫组化结果显示CPNE3在胃癌中高表达（P<0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示CPNE3高表达组患者5年生存率显著降低（P<0.01）。单因素及Cox回归分析显示CPNE3高表达、CEA≥5μg/L、CA19-9≥37 kU/L、T₃-T₄期和N₂-N₃期是影响胃癌根治术后5年生存率的独立危险因素。ROC曲线分析显示CPNE3预判术后5年死亡的敏感度为79.59%，特异性为74.55%（P<0.05）。GO富集分析预测显示CPNE3可能与负向调控胃癌细胞凋亡有关。体外实验显示，si-CPNE3组的细胞凋亡率以及Bax、Cleaved Caspase-3表达的增多，而Bcl-2表达减少；LV-CPNE3组则结果相反（P<0.05）。机制分析显示，si-CPNE3组p-PI3K、p-AKT表达降低，LV-CPNE3组则增多（P<0.05）；另外，LY294002减弱了CPNE3过表达对胃癌细胞凋亡的抑制作用（P<0.05）。结论 CPNE3在胃癌组织中高表达且对患者的远期预后具有预测价值，可能与其通过激活PI3K/AKT信号通路抑制胃癌细胞的凋亡有关。
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  基于距匹配及判别表征学习的多模态特征融合分类模型研究：高级别胶质瘤与单发性脑转移瘤的鉴别诊断

  张振阳, 谢金城, 钟伟雄, 梁芳蓉, 杨蕊梦, 甄鑫

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 138-145.

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  目的 探索基于距匹配及判别表征学习的多模态特征融合分类模型在鉴别高级别胶质瘤（HGG）与单发性脑转移（SBM）中的鉴别能力和应用价值。方法 收集了121例患者（61例HGG和60例SBM）的多参数磁共振成像（MRI）扫描图像，在T1W1、T2W1、T2加权液体衰减反转恢复（T2＿FLAIR）和T1WI增强图像（CE＿T1WI）4种常规轴位MRI图像上勾画目标感兴趣区域（ROI），并使用开源影像组学工具Pyradiomics从4个MRI序列分别提取影像组学特征。使用本研究提出的基于距匹配及判别表征学习的多模态特征融合分类模型对4个MRI序列的影像组学特征进行融合并得到分类模型。采用五折交叉验证方法和特异性（SPE）、灵敏度（SEN）、准确率（ACC）、ROC曲线下面积（AUC）评价该分类模型的鉴别性能。将本研究所提模型与其他特征融合分类模型对于HGG与SBM的鉴别能力进行定量比较，同时对本研究提出特征融合方法得到的融合特征进行样本散点可视化实验，验证本研究所提出的多模态特征融合分类模型的可行性和有效性。结果 五折交叉验证结果显示本研究所提出的基于距匹配及判别表征学习的多模态特征融合分类模型在鉴别高级别胶质瘤与单发性脑转移瘤中的SPE、SEN、ACC、AUC分别为：0.871、0.817、0.843、0.930，且特征融合方法在可视化实验中具有优秀的表现。结论 基于距匹配及判别表征学习的多模态特征融合分类模型在鉴别高级别胶质瘤与单发性脑转移瘤中的应用具有优秀的鉴别能力和较高的应用价值。同时，与其他特征融合分类模型相比，本研究提出的分类模型在HGG与SBM的鉴别分类任务中具有较大的优势。
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  基于16S rRNA测序分析阻塞性睡眠呼吸暂停患者肠道靶标菌群的变化

  朱继伟, 卢曼路, 焦倩倩, 孙运良, 刘璐, 丁红红, 于燕, 潘磊

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 146-155.

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  目的 分析阻塞性睡眠呼吸暂停（OSA）患者和健康人群肠道菌群的差异，探讨肠道菌群在OSA发病中的作用及意义。方法随机纳入2022年1月～12月就诊于本院诊断为OSA的患者39例作为OSA组，健康志愿者20例作为对照组。收集两组人群的粪便标本，通过16S rRNA高通量测序分析其微生物组成，分析两组人群肠道菌群之间的Alpha多样性、Beta多样性、物种差异与标志物种和差异生物功能代谢通路功能预测分析。结果 Alpha多样性分析显示，OSA组的物种多样性指数Shannon和Simpson、物种丰度指数Observed species及菌群均匀度指数Pielou均低于对照组（P<0.05）;Beta多样性分析显示，两组间群落结构存在差异（P<0.05）。OSA组肠道菌群群落结构上与对照组存在差异，潜在致病菌属如假单胞菌属、巨单胞菌属等菌群丰度增加（P<0.05）。LEfSe分析结果显示，与对照组相比，OSA组假单胞菌属、巨单胞菌属、梭杆菌属丰度升高（P<0.05）。关联网络分析结果显示，影响宿主稳态的为差异标志菌群；随机森林分析和ROC曲线结果显示，假单胞菌属是具有重要鉴别意义的生物标志菌属。差异代谢通路预测功能显示，维持肠道菌群稳态起主要作用功能的是生物合成功能，假单胞菌属参与了芳香族生物胺降解和酮葡萄糖酸代谢。结论 OSA患者存在肠道菌群紊乱，肠菌中假单胞菌属可能通过参与物质代谢影响OSA发生发展，可望作为防治OSA的潜在肠菌靶标。
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  C/EBPβ介导NPHP1敲低的肾小管上皮细胞TNF-α通路下游炎症因子的表达

  黄丹梅, 刘雅清, 李丹彤, 张静兰, 杨翌晨, 孙良忠

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 156-165.

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  目的 探讨NPHP1基因缺陷肾小管上皮细胞TNF-α信号通路激活及其调控的炎症因子表达。方法 使用重组慢病毒LVNPHP1-RNAi构建敲低NPHP1表达的人近端肾小管细胞株（HK2）细胞(NPHP1^KDHK2)。通过实时荧光定量PCR、Western blot、酶联免疫吸附实验法检测各细胞株TNF-α表达、p38和C/EBPβ激活状态及其调控炎症因子CXCL5、CCL20、IL-1β、IL-6、MCP-1等表达情况。通过构建siRNA敲低野生型和NPHP1^KDHK2细胞C/EBPβ表达，观察上述指标变化。结果 敲低NPHP1表达后，NPHP1^KDHK2细胞TNF-α、C/EBPβ、CXCL5、IL-1β和IL-6的mRNA表达量增加（P<0.05）;Western blotting结果显示，phospho-p38、C/EBPβ表达上调（P<0.05）；培养液上清IL-6水平增加（P<0.05）。使用siRNA敲低C/EBPβ表达后，NPHP1^KDHK2细胞CSF2、CCL20、IL-1β和IL-6的m RNA表达水平下调（P<0.05）;Western blot显示phospho-p38表达下调（P<0.05）；培养液上清IL-6水平下降（P<0.001）。结论 NPHP1基因缺陷的NPHP1^KDHK2细胞中TNF-α信号通路被激活，其调控的下游印证因子表达上调。C/EBPβ可能是介导NPHP1^KDHK2细胞TNF-α信号通路相关炎症因子表达的关键转录因子。
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  亚精胺通过抑制细胞凋亡、ROS生成及铁死亡减轻脂多糖诱导的小鼠心肌损伤

  张晓红, 赵品, 蒯建科, 常超, 袁庆

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 166-172.

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  目的 观察亚精胺（SPD）对脂多糖（LPS）诱导的脓毒症心肌损伤的保护作用及机制研究。方法 在动物水平上，C57BL/6小鼠随机分为：空白对照组（Control）、LPS组（10 mg/kg）、LPS+SPD组（5 mmol/L），应用HE染色观察小鼠心肌组织形态变化，透射电镜观察心肌线粒体超微结构。在细胞水平上，根据处理方式及10和20μmol/L SPD，将大鼠H9c2心肌细胞随机分为：Control、LPS、LPS+SPD 10、LPS+SPD 20组，应用CCK-8试剂盒检测细胞活力，乳酸脱氢酶试剂盒检测细胞LDH水平、ELISA测定心肌细胞cTNI的变化，Western blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved-caspase3表达水平及铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4表达水平，应用荧光探针检测细胞活性氧ROS及Fe²⁺水平，JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位。结果 小鼠心肌组织HE染色及透射电镜结果显示：Control组心肌及线粒体结构正常，LPS处理后，小鼠心肌组织结构紊乱、间隙变大，并且线粒体明显损伤，出现肿大、空泡化及坏死等现象，SPD处理可改善LPS导致的心肌及线粒体损伤。细胞水平上，与空白对照组相比，LPS组细胞活力明显下降（P<0.05）,LDH、cTNI水平明显升高（P<0.05），细胞凋亡蛋白Bax、Cleaved-caspase3水平增加（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）,SLC7A11、GPX4蛋白的表达水平降低（P<0.05），细胞活性氧ROS及Fe²⁺水平增加（P<0.05），线粒体膜电位下降；经SPD预处理后，H9c2细胞活力明显增加（P<0.05）,LDH、cTNI水平降低（P<0.05），细胞凋亡蛋白Bax,Cleaved-caspase3的表达水平降低（P<0.05）,Bcl-2蛋白表达水平增加（P<0.05），铁死亡相关蛋白SLC7A11、GPX4的表达水平增加（P<0.05），细胞活性氧ROS及Fe²⁺水平降低（P<0.05），线粒体膜电位上升。结论 SPD可减轻脓毒症心肌损伤，其机制与降低细胞凋亡、抑制细胞活性氧ROS产生、减轻铁死亡有关。
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  敲低结肠癌转移相关基因1促进RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡

  孙硕, 黄鑫, 李国东, 张春云, 卢泽梅, 张伟伟, 李泽彦, 杨清竹

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 173-178.

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  目的 探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)对RAS选择性致死化合物3(RSL3)诱导的结直肠癌细胞铁死亡的影响及其分子机制。方法 体外培养结直肠癌细胞SW620,HCT116,LOVO及RKO细胞，Western blot实验检测细胞中MACC1表达；以SW620细胞为实验材料，MTT法检测不同浓度（0、2.5、5、10、20、40μmol/L）铁死亡诱导剂RSL3以及不同浓度（0、5、10、20μmol/L）铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞存活率的影响，分析单独使用10μmol/L RLS3以及10μmol/L RLS3和10μmol/L Fer-1联合作用对SW620细胞存活率的影响，并检测干扰MACC1后不同浓度RSL3对SW620细胞存活率的影响；实时定量RT-PCR和Western blot法检测不同浓度RSL3(0、2.5、5、10μmol/L)对MACC1在mRNA和蛋白水平的影响，并检测干扰MACC1后GPX4在mRNA和蛋白水平的表达；流式细胞仪及激光共聚焦实验检测干扰MACC1后，SW620细胞中脂质过氧化Lipid ROS水平的变化。结果 4种结直肠癌细胞中SW620细胞MACC1表达量最高；铁死亡诱导剂RSL3抑制SW620细胞的存活率，细胞存活率随RSL3浓度升高而降低，呈剂量依赖性；不同浓度的铁死亡抑制剂Fer-1对SW620细胞的存活率没有影响；与对照Ctrl组细胞存活率相比，单独使用RSL3细胞存活率降低了50%(P<0.01)，而联合使用RSL3与Fer-1处理SW620细胞，细胞的存活率得到恢复（P>0.05）；不同浓度的RSL3作用于SW620细胞后，细胞中MACC1基因在mRNA和蛋白水平被显著抑制（P<0.01），具有一定的药物浓度依赖性。siRNA干扰MACC1基因表达后，增强RSL3对SW620细胞毒作用，并抑制细胞中GPX4的表达（P<0.01），增加细胞中Lipid ROS水平（P<0.05）。结论 MACC1通过调控GPX4影响RSL3诱导的结直肠癌细胞铁死亡。
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  早幼粒细胞白血病蛋白与TAK1结合蛋白相互作用的生物信息学分析与验证

  成佳聪, 李智慧, 刘鳐, 李成, 黄鑫, 田颖鑫, 沈富兵

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 179-186.

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  目的 通过生物信息学方法预测早幼粒细胞白血病蛋白与TAK1结合蛋白的相互作用，并通过免疫共沉淀方法进行实验验证。方法 使用Rosetta软件，采用比较建模的方法，构建TAB1蛋白的三维模型；在PDB数据库中检索PML蛋白二级结构，并解析其晶体结构和三维结构。Zdock3.0.2软件进行PML与TAB1的蛋白-蛋白对接，并提取最佳构象进行对接模型的分子结构分析。α-MMC处理的M1炎性巨噬细胞，利用免疫共沉淀技术检测两种蛋白的相互作用。结果 以PML的6IMQ为对接部位时，PML蛋白与TAB1蛋白能形成3个盐桥、6个氢键和6个疏水作用；以PML的5YUF为对接部位时，PML蛋白与TAB1蛋白能形成1个氢键、3个静电相互作用和9个疏水作用，两种对接模式皆能形成良好的分子对接和相互作用；在α-MMC处理4 h后，其PML-IP组的细胞裂解沉淀液中分别能检测到显著的PML和TAB1阳性蛋白条带。结论 PML蛋白与TAB1蛋白能发生较强的相互作用。
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  LncRNA SOX2OT靶向SIRT1/自噬通路增强胆管癌细胞5-FU耐药

  辛辰, 王笑影, 李响, 陈宇, 王雪, 宁佳曦, 杨适, 王忠琼

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 187-193.

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  目的 探讨LncRNA SOX2OT靶向SIRT1/自噬通路调节胆管癌细胞5-FU耐药的机制。方法 将未用5-FU处理HCCC-9810细胞和不同浓度（50、100、150、200μg/mL）5-FU处理的HCCC-9810细胞分为对照组和模型组，qRT-PCR检测LncRNA SOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平，Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62蛋白表达。pcDNA3.1-SOX2OT和pcDNA3.1-NC转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞，CCK-8检测细胞耐药性，划痕实验检测细胞迁移能力，qRT-PCR检测LncRNA SOX2OT、SIRT1 mRNA表达水平，Western blot检测SIRT1、Beclin1、LC3和p62表达。在以上基础上做了Rescue实验，将OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-NC(75 pmol/孔)、OV-SOX2OT(2μg/孔)和si-SIRT1(75 pmol/孔)分别共转染HCCC-9810/5-FU耐药细胞，分组为OV-SOX2OT+si-NC组和OV-SOX2OT+si-SIRT1组，以证明LncRNA SOX2OT通过SIRT1影响自噬，并由此影响胆管癌细胞对5-FU的耐药性。RNA Pulldown验证SOX2OT与SIRT1的靶向结合关系。结果 不同浓度的5-FU均能抑制HCCC-9810细胞增殖（P<0.05）。与对照组相比，模型组SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.001）、SIRT1和LncRNA SOX2OT mRNA水平（P<0.05）均明显增加。与OV-NC组相比，OV-SOX2OT组细胞迁移能力、SIRT1、Beclin1(P<0.001)和p62(P<0.05)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.001）、SIRT1和LncRNA SOX2OT mRNA(P<0.05)水平均明显增加。沉默SIRT1表达导致LncRNA SOX2OT过表达的HCCC-9810细胞对5-FU的耐药性显著降低。与OV-SOX2OT+si-NC组相比，OV-SOX2OT+si-SIRT1组SIRT1(P<0.001)、p62和Beclin1(P<0.01)蛋白表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值（P<0.01）、SIRT1 mRNA(P<0.05)水平均明显降低。RNA Pulldown检测结果显示SOX2OT能够直接与SIRT1结合。结论 LncRNA SOX2OT通过上调SIRT1表达促进自噬来增强胆管癌HCCC-9810细胞5-FU耐药性。
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  基于磁共振图像机器学习放射组学模型预测脑胶质瘤的强化

  何慧珊, 郭二嘉, 蒙文仪, 王彧, 王雯, 何文乐, 吴元魁, 阳维

  南方医科大学学报. 2024, 44(01): 194-201.

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  目的 开发一个基于T2液体衰减反转恢复序列（T2-FLAIR）图像准确预测胶质瘤MRI强化模式的机器学习放射组学模型，为优化胶质瘤患者的MRI检查流程提供潜在的理论依据。方法 回顾性收集385例手术病理确诊的脑胶质瘤的术前MRI T2-FLAIR图像，根据强化模式分成强化和无强化两类，在训练组（201例）基于高斯过程、线性回归、线性回归最小绝对收缩和选择算子、支持向量机、线性判别分析和朴素贝叶斯这6种分类器分别建立预测胶质瘤强化模式的组学模型，并在内部验证组（85例）和外部验证组（99例）进行测试。应用受试者操作特征曲线评估其预测性能。结果 以高斯过程作为分类器的由15个放射组学特征组成的预测模型在训练组和内部验证组均具有最高的预测性能，其曲线下面积分别是0.88(95%CI:0.81,0.94)和0.80(95%CI:0.71,0.88)，在外部验证组的曲线下面积、敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值分别是0.81(95%CI:0.71,0.90)、0.98、0.61、0.76、0.96。结论 基于T2-FLAIR的机器学习放射组学模型可准确预测胶质瘤的MRI强化模式。