药物进入人体循环后，以游离型和结合型两种形式进行转运和储存，两者处于动态平衡，只有游离型药物才能跨膜转运及发挥药理活性，而结合型药物会以体内储存的形式暂时失去药理活性，因此药物在血液中游离浓度的高低是其疗效好坏的关键。为实现个体化治疗，在越来越多的临床情况中，测定药物的游离浓度愈发重要。药物的游离浓度受到多种因素影响，如年龄、性别、血浆白蛋白水平、药物相互作用等。目前测定药物游离浓度的方法很多，有传统的方法如平衡透析法、超滤法等，也有新兴的方法如中空纤维离心超滤法、快速平衡透析法等。每种测定方法都有其固有的优缺点，而针对不同特性的药物采取不同的测定方法往往才能获得准确的分析结果。本文综述了9种经典且目前常用的方法，并重点介绍了每种测定方法的原理、适用范围以及优缺点。