目的 建立猴痘病毒(mpox virus)的实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测方法。方法 以猴痘病毒F3L基因为靶序列，设计特异性引物和探针，建立猴痘病毒RT-PCR检测方法，并对方法的灵敏度、特异性和重复性进行检测；对疑似猴痘阳性的人脓拭子临床样本核酸进行检测，对RT-PCR方法检测临床样本能力进行评价。结果 本研究建立的RT-PCR检测方法可实现猴痘病毒的特异性检测，与天花、痘苗、牛痘等其他正痘病毒无交叉反应，检测重复性好，最低检测限为10～3copies/μL。可以对人皮肤拭子样本中的猴痘病毒进行准确检测。结论 本研究建立了猴痘病毒的RT-PCR检测方法，可在临床样本中快速、特异、灵敏的检测猴痘病毒。