目的 建立一种简单、灵敏、快速的肺炎支原体(MP)检测方法，并对其应用性进行验证和评价。方法 利用多交叉置换扩增(MCDA)技术对肺炎支原体特异基因CARDS毒素基因进行扩增，利用侧流免疫层析生物传感(LFB)技术读取扩增结果，命名该方法为MP-MCDA-LFB。分析扩增反应在60～67℃(间隔1℃)的扩增效率，筛选最适反应温度；分析分别扩增10、20、30、40 min时能够检测到的最低核酸浓度，筛选最佳反应时间。利用10倍系列稀释的肺炎支原体核酸分析MP-MCDA-LFB方法的灵敏度和检测限，利用35株非肺炎支原体菌株分析MP-MCDA-LFB方法的特异性。利用MP-MCDA-LFB方法检测80份疑似MP感染的临床样本，并与RT-PCR法检测结果进行比较，分析MP-MCDA-LFB方法的临床应用性。结果 MP-MCDA-LFB能够实现对肺炎支原体CARDS毒素基因的快速检测。其最佳反应温度为63℃,最短反应时间为40 min,整个检测过程可在1 h内。MP-MCDA-LFB方法具有较高的灵敏度和特异性，其检测限低至45 ng/L,与其他临床表现相似的病原体无交叉反应，特异性为100%。MP-MCDA-LFB方法从80份临床样本中检出45份阳性样本(56.3%),检出率与RT-PCR方法一致。结论 本研究建立的以CARDS毒素基因为靶标的MP-MCDA-LFB检测方法具有简单、快速、灵敏度高、特异性强的优点，在基层医疗机构和现场检测具有较好的应用潜力。