为了解浙江省内不同黄缘闭壳龟（Cuora flavomarginata）群体的种质资源现状，基于线粒体DNA COI序列对来自浙江省内野外和养殖场的8个黄缘闭壳龟群体的遗传多样性和遗传结构进行比较分析。结果表明：黄缘闭壳龟线粒体COI基因序列长度为1 040 bp,A=27.4%、T=30.5%、C=24.6%、G=17.5%，有较强的AT偏好性；共定义9个单倍型，单倍型多样性（H_d）为（0.799 00±0.210 00），核苷酸多样性（P_i）为（0.002 09±0.001 47），呈“高H_d低P_i”遗传分布；不同黄缘闭壳龟群体间的遗传距离为0～0.003，群体内部的遗传距离为0～0.004，其中磐安后阁村（YS）群体内部的遗传距离最大，为0.004；单倍型系统发育树并未呈现明显的谱系结构；群体间遗传分化指数（F_(ST)）为-0.347 52～0.822 22,8个群体的遗传分化不显著（p>0.05）；中性检验（Tajima’s D=-0.366 27,Fu’s F_S=-0.605）与核苷酸错配分布均表明，浙江省内黄缘闭壳龟群体并未经历种群扩张事件，同时，由Mantel检验可知，遗传距离与地理距离没有显著的相关性（R=0.293 8,p>0.05);AMOVA分子方差结果显示，群体内的遗传变异高于群体间（85.06%>14.94%）。研究表明，浙江省内黄缘闭壳龟群体之间为高单倍型多样性和低核苷酸多样性的遗传特征，并且存在一定水平的遗传分化，群体内存在明显的基因交流，根据COI基因分析显示，在磐安县获得的野生黄缘闭壳龟个体确定为黄缘闭壳龟浙江种，同时也发现存在浙江种与安徽种的杂交种，建议将分化程度不同的黄缘闭壳龟群体划分为不同单元保护。研究结果为浙江省内黄缘闭壳龟种质资源开发利用和合理制定保护措施提供了基础依据。