为研究穿心莲HPLC指纹图谱及体外抗氧化作用的谱效关系，构建穿心莲抗氧化作用网络，整合谱效关系和网络药理学数据，预测穿心莲抗氧化作用的物质基础。采用HPLC法建立10批次穿心莲的指纹图谱；测定穿心莲对大鼠肝细胞(BRL-3A)中活性氧(ROS)及丙二醛(MDA)含量的影响；采用灰色关联分析法进行谱效关联分析，初步确定抗氧化成分；结合网络药理学，预测抗氧化候选成分；根据分析结果，探究穿心莲抗氧化成分。结果：本研究建立了穿心莲指纹图谱，共标定11个共有峰；根据灰色关联度大小排序，9、7、10、5、1、6、8、3号共有峰与BRL-3A细胞ROS含量有较高关联度；9、7、10、5、1、6、8、3号共有峰与BRL-3A细胞MDA含量有较高关联度；网络药理学推测穿心莲抗氧化成分主要包括14-脱氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯、穿心莲苷A等25个；整合分析确定穿心莲抗氧化成分为共有峰9、7、10、5、1、6、8、3代表的成分及14-脱氧穿心莲内酯、新穿心莲内酯等。综上，穿心莲抗氧化药效是多种成分共同作用的结果，穿心莲的活性成分可能主要通过细胞凋亡途径，作用于丝/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、内皮生长因子受体(EGFR)、半胱氨酸蛋白酶3(CASP3)等靶点发挥其药理作用。本研究可对穿心莲抗氧化的物质基础研究提供参考。