2024年, 第40卷, 第10期　
刊出日期：2024-10-25

  

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  正常人外周血中性粒细胞表型和功能鉴定

  王时佳, 张宇丝, 马樱, 张春梅, 张圆, 左佳佳, 许晓悦, 庄然, 张赟

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 865-871. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009856

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  目的 正常人外周血中性粒细胞的表型和功能鉴定。方法 采用密度梯度离心法和红细胞裂解方法分离正常人外周血中性粒细胞，利用多重免疫荧光染色和流式细胞术分析中性粒细胞表面标记，及其在中性粒细胞亚群中的分布特征。通过pHrodo^TM Green E.coli BioParticles^TM吞噬实验检测中性粒细胞吞噬功能。利用Wright-Giemsa染色和免疫荧光染色，分别在光学显微镜和激光共聚焦显微镜下，观察体外刺激中性粒细胞产生中性粒细胞胞外陷阱（NET）的形态学特征。结果 正常人外周血中性粒细胞高表达表面标记CD66b、 CD11b和CD16,且CD16分子表达百分率高于CD11b。中性粒细胞可根据CD16分子表达密度不同分为CD16^hi、 CD16^int和CD16^lo三个亚群，其中CD16^hi细胞亚群的百分率远高于CD16^int细胞亚群和CD16^lo细胞亚群。中性粒细胞亚群均表达抑制性分子程序性死亡配体1（PD-L1）,但在三个亚群的表达无明显差异；抑制性分子CD300LD在CD16^hi细胞亚群的表达明显高于其在CD16^int细胞亚群和CD16^lo细胞亚群中的表达。中性粒细胞亚群均高表达黏附分子CD62L,且三个亚群无明显差异。pHrodo^TM Green E.coli BioParticles^TM在CD16^int亚群上的平均荧光强度（MFI）值高于其在CD16^hi和CD16^lo亚群上的MFI值，且其在CD16^hi亚群的MFI值高于CD16^lo亚群。Wright-Giemsa染色结果显示，正常人外周血中性粒细胞多呈现分叶核形态；经佛波酯（PMA）刺激后，细胞核不再呈现分叶状态，并产生网状结构。激光共聚焦结果显示，中性粒细胞经PMA刺激后，中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）释放增加，并呈现网状结构。结论 正常人外周血中性粒细胞存在异质性，不同中性粒细胞亚群表面标记分子的表达存在差异，可能发挥不同的免疫功能；PMA可刺激中性粒细胞产生NET,不同中性粒细胞亚群产生NET能力的差异则有待进一步研究。
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  黄芪糖蛋白干扰 lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴抑制细胞焦亡改善佐剂性关节炎大鼠心肌损伤

  付皖兰, 曹云祥, 束开艳, 朱南飞

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 872-879. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009844

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  目的 基于长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5/微小RNA 21/Toll样受体4(lncRNA GAS5/miR-21/TLR4)信号轴探究黄芪糖蛋白(HQGP)对佐剂性关节炎(AA)大鼠心肌损伤的作用及机制。方法 将SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、甲氨蝶呤(MTX)组、 HQGP组，每组6只。复制AA模型，第19天开始给药，连续4周。检测各组AA大鼠足趾肿胀度、关节炎指数(AI), HE染色观察大鼠心肌组织病理变化，透射电镜观察心肌组织超微结构的变化及焦亡小体情况，ELISA检测血清白细胞介素6(IL-6)、 IL-18、 IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平，乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测心肌组织LDH释放量，实时荧光定量PCR检测心肌组织核因子κB p65(NF-κB p65)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、含pyrin结构域核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)的mRNA以及lncRNA GAS5/miR-21/TLR4信号轴分子的表达，Western blot法检测心肌组织TLR4、 NF-κB p65、 caspase-1、 NLRP3和GSDMD蛋白水平。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠足趾肿胀度、 AI显著升高；大鼠心肌纤维溶解、断裂，肌节结构模糊，心肌纤维排列紊乱，组织间有炎性细胞浸润，线粒体嵴明显断裂稀疏，焦亡小体数量增加；血清促炎细胞因子IL-6、 IL-18、 IL-1β和TNF-α表达显著升高；心肌组织中GAS5表达显著降低，miR-21表达显著升高，LDH释放量、 TLR4、 NF-κB p65、 caspase-1、 NLRP3、 GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著升高。与模型组比较，HQGP组大鼠足趾肿胀度、 AI和心肌组织病理状态明显改善；血清IL-6、 IL-18、 IL-1β和TNF-α表达显著降低；心肌组织中GAS5表达显著升高，miR-21表达显著降低，LDH释放量、 TLR4、 NF-κB p65、 caspase-1、 NLRP3的mRNA和蛋白表达水平显著降低，GSDMD的mRNA表达降低且蛋白水平显著降低。结论 HQGP通过上调lncRNA GAS5抑制miR-21/TLR4信号传导，抑制细胞焦亡，减少促炎细胞因子表达，改善AA大鼠心肌损伤。
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  CXCL8通过增加M2型巨噬细胞浸润及抑制CD8⁺T细胞浸润促进结直肠癌免疫抑制微环境的形成

  邵莹, 兰燕, 宋冰, 孙嘉颖, 杨涛

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 880-886. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009855

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  目的 探讨CXC趋化因子配体8（CXCL8）对结直肠癌（CRC）微环境的免疫调节作用。方法 使用过表达CXCL8的鼠源CRC细胞株CT26细胞建立BALB/c小鼠皮下移植瘤模型，监测肿瘤生长情况，成瘤三周后剥离肿瘤组织并取出小鼠脾脏，一方面制备肿瘤单细胞悬液，流式细胞术检测肿瘤微环境中M2型巨噬细胞及CD8⁺ T细胞的浸润情况；另一方面制备脾脏单细胞悬液，分选脾脏CD8⁺ T细胞，在体外将T细胞与过表达CXCL8的CT26细胞共培养，细胞毒性实验检测T细胞杀伤能力。结果 过表达CXCL8促进小鼠CRC移植瘤生长；过表达CXCL8的CRC组织中M2型巨噬细胞浸润增加、 CD8⁺ T细胞浸润减少；过表达CXCL8的小鼠CRC细胞并不影响CD8⁺ T细胞体外杀伤能力。结论 CXCL8过表达CRC细胞通过增加M2型巨噬细胞浸润及抑制CD8⁺ T细胞浸润促进CRC免疫抑制微环境的形成。
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  M2型巨噬细胞抑制CD8⁺T细胞促进食管癌细胞恶性生物行为

  王魏楠, 陈素芳, 段余钡, 井玉莹, 黄田平, 陈凯, 杨凯歌, 罗成华, 周文虎, 胡建明

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 887-893. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009845

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  目的 探讨M2型巨噬细胞通过抑制CD8⁺T细胞的抗肿瘤能力参与食管癌的恶性生物学行为的作用。方法 利用佛波酯（PMA）联合白细胞介素4（IL-4）/IL-13将人单核细胞白血病细胞（THP-1）诱导为M2型巨噬细胞并用实时定量PCR检测相关炎性因子。运用磁珠分选法分选健康志愿者外周血CD8⁺T细胞，用流式细胞术验证分选纯度。构建CD8⁺T细胞与食管鳞癌细胞的非接触性共培养体系（CD8⁺T细胞）,和构建M2型巨噬细胞、 CD8⁺T细胞与食管鳞癌细胞的非接触性共培养体系（M2型巨噬细胞联合CD8⁺ T细胞）。平板克隆实验和CCK-8细胞毒性实验检测各组肿瘤细胞增殖能力。Transwell^TM实验检测各组肿瘤细胞侵袭和迁移能力。流式细胞术检测并分析各组肿瘤细胞的凋亡情况。运用GraphPadPrism9.5软件进行统计学分析和制图。结果 诱导后巨噬细胞IL-10和精氨酸酶1（Arg1）表达上调，IL-12和肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达下降，具有M2表型巨噬细胞特征。磁珠分选法成功的分选出CD8⁺T细胞，其阳性率>90%。食管鳞癌细胞与CD8⁺T细胞非接触性共培养组的增殖、侵袭、迁移和抗凋亡能力显著低于单独癌细胞组；而食管鳞癌细胞与M2型巨噬细胞条件培养基预处理CD8⁺T细胞共培养后，其增殖、侵袭、迁移和抗凋亡能力与食管鳞癌和CD8⁺T细胞共培养组相比显著增强。结论 M2型巨噬细胞通过抑制CD8⁺T细胞的抗肿瘤能力促进食管鳞癌细胞的增殖、侵袭、迁移和抗凋亡。
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  二肽基肽酶3(DPP3)通过下调主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因B (MICB)的表达抑制胃癌细胞的免疫逃逸

  佟瑞莹, 蒙继清, 武婷, 武洲英, 尹云昊, 俞兰

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 894-900. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009846

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  目的 探究二肽基肽酶3（DPP3）通过调控主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关基因B （MICB）的表达对胃癌细胞免疫逃逸的影响。方法 敲低MKN-45人胃癌细胞DPP3、过表达MGC-803人胃癌细胞DPP3,观察细胞增殖、迁移能力变化及对自然杀伤（NK）细胞杀伤的反应性；采用全转录组测序筛得MICB基因，在过表达DPP3细胞中敲低MICB验证细胞行为变化。在C57小鼠验证敲除DPP3细胞的体内成瘤能力及组织中CD56⁺细胞浸润情况。结果 敲除DPP3促进胃癌细胞增殖、迁移，降低MICB表达，对NK细胞杀伤效应不敏感；小鼠成瘤能力升高且组织中CD56⁺细胞浸润降低。过表达DPP3的胃癌细胞则呈现相反结果。敲减MICB后能逆转DPP3高表达引起的细胞表型变化。结论 DPP3通过下调MICB表达抑制胃癌细胞的免疫逃逸功能。
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  吸收放散试验在混合不规则抗体特异性验证中的应用分析

  李丹, 杜娟, 杨世明, 富文达, 安宁, 杨琳, 焦琴, 陈扬, 杨龙飞

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 901-908. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009842

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  目的 分析吸收放散试验在患者血清中存在混合不规则抗体特异性验证试验中的应用价值，为建立适合患者血清中存在混合不规则抗体的特异性鉴定方法和临床输血策略提供参考依据。方法 采集患者抗凝或不抗凝血标本，离心分离血清和红细胞，取红细胞用生理盐水洗涤6次，在45～56℃进行热放散或酸试剂放散，用该红细胞在微柱凝胶法（MGT）或盐水试管法（NS）进行ABO、 Rh血型鉴定和自身抗体吸收试验。采用MGT或间接抗人球蛋白试验（IAT）对吸收自身抗体后的患者血清进行不规则抗体筛查及特异性鉴定。吸取适量吸收后的患者红细胞进行酸试剂放散，放散液用于抗体特异性验证试验。结果 在10例患者中，男性6例，女性4例，年龄39～83岁。A型5例、 B型1例、 O型2例、 AB型2例，ccdEe表型2例；Ccdee表型2例；CCDee, Le^a-表型1例；CcDEe, P₂, Fy^b-表型1例；CcDEe,Jk^b-, Fy^b-表型1例；ccDEE表型2例；CcDee表型1例。抗体特异性鉴定确认为抗D、抗C混合抗体2例，抗D、抗E混合抗体2例，抗Le^a、抗E及抗c混合抗体1例，抗P₁、抗Fy^b混合抗体1例，抗Jk^b、抗Fy^b混合抗体1例，抗C、抗e混合抗体2例，抗E抗体伴高效价冷凝集素1例。IgG型抗体8例，IgM型+IgG型抗体2例。血清抗体凝集强度为弱于1+（1+^w）～2+^w,抗体效价为1∶2～1∶16,放散液抗体凝集强度强于1+（1+^s）～3+。直接抗人球蛋白试验（DAT）阴性5例，DAT阳性5例。10例患者中6例有输血史，4例既有输血史又有妊娠史。结论 在谱细胞进行抗体鉴定凝集强度<2+、凝集强度存在强弱差异或出现全凝集现象时，采用吸收放散试验在验证血清抗体特异性鉴定结果的同时，反应强度增强，也能够检测到常规方法中漏检的抗体，提高了混合不规则抗体特异性鉴定的准确性，为患者筛查交叉配血相合的血液进行输注，以保证临床输血治疗安全有效。
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  卵巢癌关键基因CLDN4的风险模型构建与免疫细胞浸润分析

  李雪婷, 赵永政, 陆进, 孙军培, 张燕, 杜丹丽

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 909-917. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009848

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  目的 筛选卵巢癌(OV)发生过程中的关键基因，并进行免疫细胞浸润分析和风险模型构建，为OV患者的早期诊治和预后评估提供依据。方法 首先，通过数据分析工具(GEO2R)对GSE18520和GSE6008数据进行差异表达基因(DEG)筛选并绘制韦恩图；其次，对DEG进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)、蛋白互作(PPI)网络、突变与表达和预后分析，从而确定关键基因；再次，对关键基因进行风险模型构建与免疫细胞浸润分析；最后，临床收集OV组织作为实验组，收集癌旁正常组织作为对照组，通过实时定量PCR和Western blot法检测两组中紧密连接蛋白4(CLDN4)mRNA和蛋白的表达情况，并对两组结果进行对比分析。结果 CLDN4是OV发生过程中的关键基因，且随着其表达的增高，OV患者的预后风险增加，不利于患者的总体生存(OS)。CLDN4与OV微环境中的树突状细胞(DC)显著正相关，且高表达的DC对OV患者OS显著有利。CLDN4的mRNA在OV组织中表达量显著升高，CLDN4的蛋白表达水平在OV组织中显著增高，差异均具有统计学意义。结论 CLDN4是OV发生过程中的关键基因，可作为OV的潜在生物标志物和免疫治疗靶点。
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  《细胞与分子免疫学杂志》第五届编委代表会议顺利召开

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 917-917. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009882

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  <正>2024年7月22日，《细胞与分子免疫学杂志》第五届编委代表会议以线上线下相结合的形式顺利召开。新一届编委会主任陈志南院士，编委会副主任黄波教授、苏冰教授、江陆斌教授、边惠洁教授、陈丽华教授、白丽教授和庄然教授等参加了会议。
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  Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定

  徐秀章, 许耀日, 陈大伟, 夏文杰, 任慧, 邓晶, 陈扬凯, 丁浩强, 刘静, 叶欣

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 918-923. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009840

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  目的 制备Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体，分析其生物活性及对CD36（+）血小板的吞噬影响。方法 通过杂交瘤细胞株RNA提取、 PCR扩增及序列分析获得单克隆抗体（mAb）32-106的V_H和V_L基因序列；利用基因合成和重组技术构建抗人CD36嵌合抗体轻、重链的表达载体；经Zeocin及杀稻瘟菌素筛选，获得稳定表达嵌合抗体的细胞株；利用亲和层析柱纯化抗体；SDS-PAGE检测嵌合抗体纯度及分子量；ELISA及流式细胞术测定抗体结合CD36抗原的活性；通过血小板吞噬实验分析嵌合抗体参与CD36（+）血小板吞噬的能力。结果 成功构建嵌合抗体轻、重链表达载体；共转染HEK293细胞后，经筛选及克隆化获得稳定表达嵌合抗体的细胞株；蛋白银染证实嵌合抗体的纯度高及分子量正确；流式细胞术及ELISA结果表明嵌合抗体具有结合人CD36抗原的活性；血小板吞噬实验表明Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体基本丧失介导单核细胞吞噬CD36（+）血小板的能力。结论 本研究成功制备了Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体，并在体外证实其丧失介导CD36（+）血小板清除的能力，为修饰抗体用于CD36抗体介导的胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（FNAIT）治疗研究奠定了理论基础。
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  间充质干细胞在骨免疫中的研究进展

  李怡, 周文静, 陈丽华, 殷松娜, 方亮

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 924-929. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009841

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  间充质干细胞(MSC)具有增殖、多向分化潜能和免疫调节功能。目前已经在多种组织中发现并分离出MSC,并可通过体外培养、诱导得到具有生物活性的细胞及其产物。更重要的是，MSC还具有免疫调节功能，在干细胞移植治疗骨损伤相关疾病中具有重要作用。因此，本文从MSC本身生物学特性和相关功能的角度，讨论了其在骨免疫中的作用及其治疗骨损伤疾病的机制，这将有助于全面了解MSC在生理病理状态下的功能。
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  生物材料改性策略诱导骨微环境中免疫应答的研究进展

  刘潇, 刘建恒, 李明

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 930-935. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009758

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  当前生物材料普遍存在免疫调控缺陷问题，无法很好诱导利于骨缺损修复的免疫微环境限制了其广泛应用。通过对生物材料各种理化性质的改性策略研究，积极主动调控骨微环境免疫应答是解决问题的关键。本文从当前骨缺损生物材料结构与成分改性、表面改性和负载免疫活性因子改性策略入手，对孔径与孔隙结构、掺杂材料(金属)、表面形态、表面电荷、表面亲水性与疏水性、表面粗糙度以及负载不同免疫活性因子诱导骨微环境中免疫应答的研究进展进行总结，以期为进一步开发具有良好骨免疫调节特性的生物材料提供启示与思考。
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  成红细胞岛在红系发育及相关疾病中的研究进展

  邹琳茹, 白健, 魏调霞, 冯蕾, 秦鸿雁

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 936-941. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009743

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  成红细胞岛(EBI)是成红细胞发育成熟过程中形成的特殊结构，由成红细胞围绕一个中央巨噬细胞组成。其中巨噬细胞在介导EBI形成以及成红细胞增殖分化、脱核成熟过程中发挥重要的调控作用。在应激状态下，二者之间黏附分子表达异常将导致多种红系疾病的发生。提示靶向EBI中的中央巨噬细胞有望成为治疗红系疾病的新策略。文章归纳总结了EBI的结构功能、巨噬细胞和成红细胞相互作用以及EBI内中央巨噬细胞在红系疾病中的作用和治疗潜力，为临床治疗红系疾病提供新思路。
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  T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的研究进展

  李清泓, 梁红远

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 942-947. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009782

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  随着抗体工程的不断发展，靶向CD3的T细胞依赖的双特异性抗体已经发展出多种多样的结构，从而满足更多临床治疗的需求。依据是否含有Fc段可将T细胞依赖的双特异性抗体分为IgG样和非IgG样两种结构。其中轻重链错配问题是双特异性抗体最常见的制备难点，为解决该问题，目前已有多种技术应用于其结构设计中，包括杵臼技术、结构域交换技术等。由于T细胞依赖的双特异性抗体的作用机制是将T细胞重定向至肿瘤细胞继而发挥杀伤作用，因此Fc段杀伤功能的沉默、靶点的亲和力设计，以及免疫突触形成的距离设计均是T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的重点。本文将围绕以上针对T细胞依赖的双特异性抗体结构设计的研究进展进行总结。
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  调节性T细胞/Th17细胞平衡在肌骨衰减及重建中作用的研究进展

  刘晏东, 邓强, 张彦军, 李中锋, 彭冉东, 陈博

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 948-953. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009792

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  肌肉减少症和骨质疏松症并不是独立发展的疾病，相反二者之间存在密切的生理病理关系，常伴随发生(即肌骨共减综合征),这种生理病理联系也为探析肌肉再生和骨骼重塑的共同机制提供了基础。在肌骨衰减过程中，炎症作用是疾病发展的重要机制，而调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比值是免疫平衡炎症反应的重要调节机制。如果Treg数量和功能受损，而Th17细胞的活性增强，将会造成Treg与Th17细胞之间的平衡失调，导致炎症反应的增加和组织损伤的累积，最终导致成肌和成骨功能受损。通过调节Treg/Th17细胞免疫平衡则可以改善肌骨衰减的症状。
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  细胞与分子基础模块化整合课程教学中的思政探索与实践

  李霞, 茹懿, 赵晶

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 954-958. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009828

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  课程思政是现代高等教育的重要组成部分，在医学类等专业课程教学中融入思政教育是落实高校立德树人的重要途径。医学模块化整合课程是目前国内医学院校广泛采用的一种医学教育模式。本文以“细胞与分子基础”整合课程为例，总结了我们在该模块化整合课程教学中的思政探索与实践。首先更新教学理念，专业课程与思政协同育人；其次重塑课程目标，知识、能力和素养并重；最后，深入挖掘思政元素，建立了丰富的思政素材库：弘扬中国科学家精神，筑牢政治素养，传承中华优秀传统文化，坚定文化自信，共享诺贝尔奖得主的故事，培养科学精神，以学风和学术规范为镜，强化职业素养，严守伦理和道德底线，提高法治意识。通过以上举措，以专业知识为载体，实现知识、能力与思政教育同向同行，协同育人，同时提升教师的思政意识与能力。