目的 探究9次跨膜超家族蛋白2(TM9SF2)缺失对水疱性口炎病毒(VSV)复制的影响，并探究其参与抗病毒先天免疫的作用机制。方法 采用转染小干扰RNA(siRNA)方法敲低人非小细胞肺癌细胞(A549)中TM9SF2基因；采用CCK-8法检测细胞增殖活性；建立VSV-绿色荧光蛋白(VSV-GFP)感染细胞模型；空斑实验检测病毒上清滴度；采用实时定量PCR和Western blot法检测VSV病毒感染A549细胞后病毒基因组复制的mRNA水平和蛋白水平表达情况，以及检测用双链RNA类似物聚胞苷酸[poly(I∶C)]刺激细胞后Ⅰ型干扰素信号通路中β干扰素(IFN-β)mRNA水平和干扰素调节因子3(IRF3)蛋白磷酸化水平。结果 与阴性对照组相比，TM9SF2敲低效果显著；敲低TM9SF2后不影响A549细胞增殖；成功建立VSV-GFP感染A549细胞模型；在病毒刺激下，敲低TM9SF2后细胞荧光强度减弱，显著下调VSV的mRNA水平和蛋白水平，VSV的病毒滴度降低；在poly(I∶C)刺激下，敲低TM9SF2显著上调IFN-β的mRNA水平和IRF3蛋白磷酸化水平。结论 TM9SF2缺失抑制VSV的复制，正向调控Ⅰ型干扰素信号通路，增强宿主抗病毒先天免疫反应。

目的 采用Cre-loxP技术构建并鉴定自然杀伤(NK)细胞条件性Cd226基因敲除小鼠，进一步探索NK细胞表面CD226分子在缓解溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道炎症中的作用。方法 通过loxP标记的转基因小鼠以及天然细胞毒性受体1(Ncr1)-Cre工具鼠，依靠Cre-loxP系统构建NK细胞条件性Cd226基因敲除小鼠模型；采用PCR技术和琼脂糖凝胶电泳技术对小鼠基因型进行鉴定，用葡聚糖硫酸钠诱导构建Cd226基因敲除小鼠UC模型；流式细胞术检测NK细胞上CD226的表达水平以及相关免疫细胞在结肠组织的浸润水平；HE染色验证结肠组织炎症水平。结果 DNA凝胶电泳技术和流式细胞术证实NK细胞条件性Cd226基因敲除小鼠成功构建，NK细胞条件性敲除Cd226基因后，UC小鼠模型炎症状况缓解，流式细胞术结果显示外周血和结肠固有层中NK细胞比例降低，HE染色结果显示肠道炎症反应减轻。结论 NK细胞特异性敲除Cd226通过减少NK细胞数量及抑制其促炎功能缓解小鼠UC模型肠道炎症。

目的 观察高糖刺激的系膜细胞(GMC)源外泌体(Exo)对C57BL/6小鼠肾脏的影响及通络益肾方(TLYSF)的干预机制。方法 大鼠GMC分为正常糖组(NG,5.6 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,30 mmol/L葡萄糖),培养24 h后收集上清，超速离心法提取Exo,透射电镜及Western blot法鉴定Exo。C57BL/6雄性小鼠分为NO-Exo组、 NG-Exo组、 HG-Exo组，分别予以尾静脉注射PBS缓冲液、正常糖培养的GMC源Exo、高糖培养的GMC源Exo,每周3次，共8周。8周后，将HG-Exo组小鼠随机分为3组：HG-Exo组(生理盐水灌胃)、 HG-Exo联合TLYSF组[34.32 g/(kg·d)TLYSF灌胃],HG-Exo联合VAL组[10.4 mg/(kg·d)缬沙坦悬液灌胃],干预4周。检测尿微量白蛋白(mALb)、尿N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)、糖化血红蛋白(HbA1c),血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);透射电镜观察足细胞超微结构；TUNEL检测肾组织细胞DNA损伤情况；组织免疫荧光检测核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)及Wilms肿瘤蛋白1(WT-1)的表达；实时定量PCR检测NLRP3、半胱天冬酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、 miR-200c-3p及miR-148a-3p mRNA的水平；Western blot法检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、 caspase-1及IL-1β蛋白的表达。结果 与NG-Exo组相比，HG-Exo组小鼠mALb、尿NAG、 Scr及BUN水平显著增加；透射电镜可见足细胞膜破裂、线粒体肿胀；TUNEL染色细胞阳性率升高，NLRP3光密度升高、 WT-1光密度下降；NLRP3、 caspase-1、 IL-1β mRNA及miR-200c-3p、 miR-148a-3p表达显著增加，NLRP3、 ASC、 caspase-1及IL-1β蛋白表达增加。与HG-Exo相比，HG-Exo联合TLYSF组小鼠mALb、尿NAG、 Scr及BUN水平降低，足细胞膜相对完整，线粒体损伤减轻；TUNEL染色细胞阳性率降低，NLRP3光密度下降，WT-1光密度上升，NLRP3、 caspase-1、 IL-1β、 miR-200c-3p、 miR-148a-3p mRNA水平均有不同程度的下降，NLRP3、 ASC、 caspase-1及IL-1β蛋白表达下降。结论 高糖刺激的GMC源Exo可损伤小鼠肾脏，诱导足细胞焦亡；TLYSF可能通过下调外泌体miR-200c-3p、 miR-148a-3p表达、抑制NLRP3/ASC/caspase-1通路活化而改善足细胞焦亡。

目的 利用单细胞转录组(scRNA-seq)数据分析，高维加权基因共表达网络分析(hdWGCNA)探索缺血性脑卒中(IS)巨噬细胞亚群。方法 基于单细胞测序数据获得不同细胞类型的转录组信息，并选择巨噬细胞进行亚群鉴定。利用hdWGCNA、细胞通讯和拟时序分析等方法探讨IS后巨噬细胞的亚群特征，并结合芯片数据筛选出与IS相关的枢纽基因进行接收者操作特征(ROC)分析验证其诊断价值，通过基因集富集分析(GSEA)探究其潜在功能。结果 scRNA数据分析显示IS后巨噬细胞的亚群组成显著变化，其中一个巨噬细胞亚群在卒中组中富集，命名为MCAO-特异性巨噬细胞(MSM)。拟时序分析表明，MSM处于巨噬细胞分化的中间阶段。细胞通讯分析揭示MSM与其他细胞间存在复杂相互作用，CC基序趋化因子配体6/CC基序趋化因子受体1(CCL6/CCR1)信号轴可能在神经炎症中发挥重要作用。hdWGCNA识别出与MSM相关的两个基因模块，显著富集于核苷酸结合寡聚结构域样受体(NLR)和抗原加工等信号通路。通过筛选MSM差异基因与常规转录组数据，识别精氨酸酶1(Arg1)、C型凝集素结构域家族4成员D(CLEC4D)和C型凝集素结构域家族4成员E(CLEC4E)这3个与IS相关的枢纽基因。结论 本研究揭示了IS后巨噬细胞亚群的特征及其功能，筛选出3个具有潜在诊断价值的枢纽基因，可能为完善IS的病理机制提供了新的见解。

目的 探讨胎盘绒毛膜板来源的间充质干细胞(hpcMSC)对脑卒中模型小鼠认知功能、神经炎症、神经元损伤及突触可塑性的影响，并探讨其机制。方法 采用大脑中动脉阻塞(MCAO)小鼠模型。将小鼠随机分为假手术组、 MCAO组和hpcMSC治疗组，最终每组纳入7只。hpcMSC治疗组小鼠在MCAO术后1 d、 3 d和10 d接受hpcMSC移植。MCAO术后1个月，通过Morris水迷宫和Y迷宫行为学测试评估小鼠的认知能力；使用HE染色、 Nissl染色、 Golgi染色和免疫荧光染色技术分析海马神经元的形态学及突触功能；荧光标记法分析小胶质细胞密度及活化情况；ELISA分析脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6水平；通过Western blot法检测磷酸化的丝裂原活化蛋白激酶激酶1(p-MEK1)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)及磷酸化的环磷腺苷效应元件结合蛋白(p-CREB)等与神经保护相关的信号通路蛋白的表达；并利用海马离体脑片进行电生理学检测。结果 与MCAO组相比，hpcMSC治疗组小鼠的认知能力显著改善，神经炎症明显减轻(小胶质细胞活化降低且炎症因子TNF-α、 IL-1β和IL-6水平降低),海马CA1区的神经元密度增加且神经元形态学恢复正常，并显著增加了尼氏阳性细胞的数量和海马神经元树突棘的密度，且微型兴奋性突触后电位(mEPSP)频率得到恢复。此外，hpcMSC治疗显著提高了海马中p-MEK、 p-ERK和p-CREB的表达水平。结论 hpcMSC移植可通过减轻神经炎症、改善海马神经元功能、促进突触可塑性并激活MEK/ERK/CREB信号通路，从而减轻卒中小鼠的认知功能障碍和海马神经元损伤。此研究为卒中后的神经修复提供了新的潜在治疗策略。

目的 探究吴茱萸碱（EVO）对活化T细胞增殖的抑制特性。方法 采用密度梯度离心法从健康供体中提取外周血单个核细胞（PBMC）,采用免疫磁珠法纯化T细胞，抗人CD3/CD28抗体活化T细胞。以不同浓度的EVO（0.37、1.11、3.33、 10）μmol/L作用于T细胞。流式细胞术测定T细胞增殖率、凋亡率、存活率、 CD25表达水平以及细胞周期分布。ELISA分析细胞因子白细胞介素2（IL-2）、 IL-17A、 IL-4和IL-10的表达水平。结果 （1.11、 3.33、 10）μmol/LEVO能有效抑制活化T细胞增殖，其半数抑制浓度(IC₅₀)为（1.5±0.3）μmol/L。EVO不诱导活化T细胞凋亡，且不影响静息T细胞的存活率。EVO不影响活化T细胞CD25的表达及IL-2的分泌。EVO阻滞T细胞周期于G2/M期，使G2/M期细胞增加，且具有浓度-效应关系。EVO不影响活化T细胞分泌IL-4、 IL-10,但显著抑制IL-17A的分泌。结论 EVO对T细胞的活化过程无显著影响，但可通过阻滞细胞周期于G2/M期，从而抑制T细胞的增殖，并显著抑制促炎因子IL-17A的分泌。提示EVO有望作为先导物，促进低毒高效性免疫抑制剂的研发，并有助于阐释传统中药吴茱萸在抗炎及免疫调节中的作用机制。

目的 本研究旨在使用断点回归设计(RDD)探索血清总胆汁酸(TBA)和胃癌(GC)之间的因果关系。方法 1244例GC患者和1333例健康对照者被纳入研究，收集两组患者的一般情况、胆囊病史、肿瘤标志物和血清TBA。采用logistic回归构建风险预测模型，获得GC的风险。以血清TBA为分组变量，个体患GC的风险为结果变量进行RDD。结果 GC风险预测模型中的预测因素是年龄、性别、身体质量指数(BMI)、血清TBA、癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原199(CA199)和CA125。血清TBA是GC的独立危险因素(OR=1.054, 95%CI:1.030～1.079)。RDD结果显示，当血清TBA=8μmol/L时，患GC的概率急剧增加23.7%。有效性和稳健性检验后，断点仍具有统计学意义。结论 血清TBA和GC之间存在正因果关系，当血清TBA=8μmol/L时，个体患GC的风险急剧增加。

目的 探究肿瘤蛋白翻译调控1反义RNA1（TPT1-AS1）靶向miR-324/核转录因子扭曲相关蛋白1（TWIST1）轴调控上皮性卵巢癌（EOC）细胞的增殖、侵袭、迁移及血管生成从而影响卵巢癌（OC）发展的作用机制。方法 实时定量PCR检测29例OC灶及癌旁组织样本中TPT1-AS1和miR-324的表达；构建“TPT1-AS1过表达”与“miRNA324敲除”的两种OC细胞模型，并采用CCK-8、 Transwell^TM和划痕试验法检测细胞增殖、侵袭和迁移能力；Western blot法检测TWIST1、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、血管内皮生长因子A（VEGF-A）的蛋白表达；荧光原位杂交实验、 RNA下拉实验验证TPT1-AS1与miR-324之间的相互作用；免疫组织化学染色法检测、 Targetscan生物信息学分析验证miR-324的表达对上皮-间质转化（EMT）过程及血管生成有负调控作用。结果 TPT1-AS1在OC组织中的表达水平显著高于癌旁组织，而miR-324的表达水平在OC组织中则显著低于癌旁组织。在TPT1-AS1过表达的人卵巢癌细胞株SKOV3细胞中，miR-324的表达水平明显下降，TPT1-AS1与miR-324呈显著负相关。实验还发现，TPT1-AS1与miR-324在OC细胞中共同表达，并且二者之间存在直接结合关系。下调miR-324显著促进了SKOV3细胞的增殖、侵袭和迁移能力。进一步研究发现miR-324与EMT关键转录因子TWIST1 3′-UTR端有结合位点，抑制miR-324表达可以上调TWIST1的转录水平，从而导致E-cadherin蛋白表达的下降和Vimentin蛋白表达的上升。此外，miR-324下调时，VEGF-A蛋白表达水平上升。结论 本研究揭示了TPT1-AS1通过负调控miR-324/TWIST1轴促进EOC细胞增殖、侵袭、迁移以及血管生成，从而促进OC的发展，这些发现为OC的诊断和治疗提供了新的潜在靶点。

目的 原核表达小鼠白血病相关蛋白16 (LRP16)蛋白中第59至145位氨基酸的抗原序列并制备兔抗小鼠LRP16多克隆抗体。方法 利用分子克隆法构建原核表达质粒pLS962-LRP16,转入E.coli Rosetta,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达LRP16蛋白。采取Ni-NTA亲和柱和分子筛柱进行重组蛋白的纯化。用纯化后的LRP16蛋白作为抗原，免疫新西兰兔制备抗血清，并用ELISA测定抗体滴度。抗血清经抗原亲和纯化后，用Western blot及免疫荧光法进行鉴定。结果SDS-PAGE显示LRP16融合蛋白成功表达，且以包涵体的形式表达；ELISA结果表明多克隆抗体效价高达1∶256 000; Western blot和免疫荧光法均显示该多克隆抗体能够特异性识别内源性的LRP16蛋白。结论 成功实现LRP16基因的原核表达，并制备特异性较好的兔抗小鼠LRP16多克隆抗体，为深入研究LRP16基因的功能奠定基础。

在缺氧缺血性脑损伤(HIBD)中，程序性细胞死亡方式——铁死亡现象被严重激活，而小胶质细胞对铁的积累具有高度敏感性。研究如何调控小胶质细胞在HIBD中的双重作用，转变为适度可控的铁死亡，对HIBD关于小胶质细胞铁死亡的靶向治疗具有较大意义。本文以HIBD为疾病模型，围绕小胶质细胞，分别从病理生理机制、小胶质细胞的极化和功能、铁死亡的分子机制、信号通路和治疗策略等方面，对小胶质细胞介导的铁死亡在HIBD中的研究作一综述。为小胶质细胞中铁死亡的研究提供参考。

慢性贫血患者(如地中海贫血)需长期依赖输注红细胞维持生命，但血型抗原的同种免疫反应常给患者的临床治疗与生存带来严重危害。输血相关同种免疫的调控机制尚不明确，如有些患者尽管长期输血，不会发生同种免疫反应；而有些患者会产生针对多种血型抗原的同种抗体，使输血治疗变得越来越困难。红细胞血型同种免疫需多种免疫细胞参与，包括抗原递呈细胞，不同的T细胞等，许多研究都在探索相关的调节作用，甚至干预措施。本文综述了细胞免疫与红细胞血型同种免疫的相关性，探讨二者之间的相互作用及其在免疫应答中的影响。

衣原体(Chlamydia)是一种专性胞内寄生的病原体，其感染可引起人和动物广泛的疾病。衣原体感染常引发机体炎症反应，严重影响宿主健康。细胞因子作为免疫调节的关键分子，在衣原体诱导的炎症过程中发挥着重要作用。在衣原体感染早期，肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)、 IL-6和γ干扰素(IFN-γ)等促炎性的细胞因子被迅速激活，参与招募免疫细胞至感染部位，启动炎症反应；而IL-10和转化生长因子β(TGF-β)在炎症持续阶段调控免疫细胞的活化程度与功能，从而影响炎症的发展进程。上述细胞因子之间存在复杂的相互作用与调节机制。本综述总结了细胞因子在衣原体诱导炎症中的作用，为衣原体感染相关疾病的诊断、治疗以及疫苗的研发提供重要的理论依据。

本研究旨在评估问题导向教学法(PBL)与案例教学法(CBL)的联合教学模式在肿瘤免疫临床教学中的实践价值，并尝试构建适应住院医师规范化培训需求的创新性教学策略。选取于2024年2月进入空军军医大学第一附属医院消化内科，接受为期12个月的住院医师规范化培训的72名住院医师为研究对象，随机分为试验组(PBL联合CBL教学)和对照组(传统讲授式教学),通过理论考核、临床实践能力评估(专科查体、影像学资料判读、病历质量规范和文献指南学习)及问卷调查评价教学效果。试验组学员在肿瘤免疫知识掌握、临床思维能力和教学满意度方面显著优于对照组。PBL联合CBL教学模式能够有效提升住院医师对肿瘤免疫知识的综合应用能力，学习兴趣和效率得到了较大提升，理论掌握度更高，开拓了临床诊疗思维，教学满意度也得到较大提升，该模式适合在临床住院医师规范化培训中推广。