Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定

徐秀章, 许耀日, 陈大伟, 夏文杰, 任慧, 邓晶, 陈扬凯, 丁浩强, 刘静, 叶欣

细胞与分子免疫学杂志 ›› 2024, Vol. 40 ›› Issue (10) : 918-923. DOI: 10.13423/j.cnki.cjcmi.009840

Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定

  • 徐秀章, 许耀日, 陈大伟, 夏文杰, 任慧, 邓晶, 陈扬凯, 丁浩强, 刘静, 叶欣
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摘要

目的 制备Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体,分析其生物活性及对CD36(+)血小板的吞噬影响。方法 通过杂交瘤细胞株RNA提取、 PCR扩增及序列分析获得单克隆抗体(mAb)32-106的VH和VL基因序列;利用基因合成和重组技术构建抗人CD36嵌合抗体轻、重链的表达载体;经Zeocin及杀稻瘟菌素筛选,获得稳定表达嵌合抗体的细胞株;利用亲和层析柱纯化抗体;SDS-PAGE检测嵌合抗体纯度及分子量;ELISA及流式细胞术测定抗体结合CD36抗原的活性;通过血小板吞噬实验分析嵌合抗体参与CD36(+)血小板吞噬的能力。结果 成功构建嵌合抗体轻、重链表达载体;共转染HEK293细胞后,经筛选及克隆化获得稳定表达嵌合抗体的细胞株;蛋白银染证实嵌合抗体的纯度高及分子量正确;流式细胞术及ELISA结果表明嵌合抗体具有结合人CD36抗原的活性;血小板吞噬实验表明Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体基本丧失介导单核细胞吞噬CD36(+)血小板的能力。结论 本研究成功制备了Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体,并在体外证实其丧失介导CD36(+)血小板清除的能力,为修饰抗体用于CD36抗体介导的胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(FNAIT)治疗研究奠定了理论基础。

关键词

CD36 / 嵌合抗体 / 人胚肾细胞 / 血小板吞噬

中图分类号

R392-33

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徐秀章, 许耀日, 陈大伟, 夏文杰, 任慧, 邓晶, 陈扬凯, 丁浩强, 刘静, 叶欣. Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定. 细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(10): 918-923 https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009840

基金

广东省自然科学基金(2022A1515012096,2024A1515012652); 广州市科技计划项目(202201011749,2024A03J0375,2023A03J549,2023A03J0552,202201010013)

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