梅花鹿（Cervus nippon）是温带森林中的重要有蹄类动物，亦是东北虎（Panthera tigris altaica）捕食的主要猎物之一。黑龙江太平沟国家级自然保护区作为东北虎跨境廊道，其野生梅花鹿种群在20世纪80年代已经野外灭绝，在保护区内，拟通过对圈养梅花鹿的行为野化，促进梅花鹿野外种群的快速恢复。然而，在行为研究过程中，瞬时扫描取样法虽然被广泛运用，但瞬时扫描具体采样间隔的科学性研究较少。因此，本研究在5、10、15、20、30、60 min不同采样间隔内得到梅花鹿的不同行为持续时间，使用线性回归的方法将不同行为持续时间进行两两比较，依据R2≥0.9、截距与0无显著差异（P> 0.05）、斜率与1无显著差异（P> 0.05）3个标准衡量采样间隔是否可以准确估计行为的持续时间，进而确定最佳采样间隔。结果表明：运动行为最佳采样间隔为5 min，休息、摄食、社会和其他4类行为的最佳采样间隔为10 min，反刍、警戒和站立行为最佳采样间隔为15 min。本研究成果有助于确保行为数据收集的科学性，提升数据收集的效率。