C6TSEDRVAJZ小分子化合物组合诱导人胎盘成纤维细胞分化为上皮样细胞

代振佳, 高群伟, 应梦娇, 王澳, 洪娟, 王春景, 郭俣, 刘长青, 刘高峰

南方医科大学学报 ›› 2025, Vol. 45 ›› Issue (02) : 322-330.

C6TSEDRVAJZ小分子化合物组合诱导人胎盘成纤维细胞分化为上皮样细胞

  • 代振佳, 高群伟, 应梦娇, 王澳, 洪娟, 王春景, 郭俣, 刘长青, 刘高峰
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摘要

目的 利用小分子化合物组合将人胎盘成纤维细胞(HPFs)重编程为化学诱导上皮样细胞(ciEP-Ls)。方法 常氧条件下培养HPFs细胞,通过免疫荧光、PCR和染色体核型分析鉴定HPFs。生理性低氧条件下(37 ℃,5%O2),HPFs在含有小分子化合物C6TSEDRVAJZ(CHIR99021、616452、TTNPB、SAG、EPZ5676、DZNep、Ruxolitinib、VTP50469、Afuresertib、JNK-IN-8、EZM0414)的培养基中进行诱导,诱导期间每日定时观察细胞形态。通过免疫荧光法、Western blotting 和 PCR 技术检测上皮细胞标志物的表达水平。对诱导细胞进行染色体核型分析,并计算诱导效率。结果 HPFs免疫荧光结果显示,表达成纤维表面标记物CD34和Vimentin,不表达上皮表面标志物;PCR结果显示,成纤维特异性基因S100A4、COL1A1高表达,且具有人正常二倍体核型。在低氧条件下诱导1 d后,部分HPFs细胞形态发生改变,由多突的纺锤形变成圆形或多边形,具有ciEP-Ls形态特征。诱导处理完成第 4天,免疫荧光和Western blotting结果显示,诱导细胞能够高表达上皮细胞特征性标志物 E-Cadherin和Lin28A(P<0.05)。PCR 结果表明,细胞显著表达上皮标志物 Smad3,GLi3,PAX8,WT1,KRT19 和 KRT18,而成纤维细胞表面标记物表达均下调,且诱导细胞具有人正常二倍体核型,HPFs重编程效率为(64.53±2.80)%~(68.10±3.60)%。结论 小分子组合C6TSEDRVAJZ 在低氧条件下成功将 HPFs 诱导为 ciEP-Ls,且具有较高的诱导效率。

关键词

化学重编程 / 小分子诱导 / 成纤维细胞 / 上皮样细胞

中图分类号

R318

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代振佳, 高群伟, 应梦娇, 王澳, 洪娟, 王春景, 郭俣, 刘长青, 刘高峰. C6TSEDRVAJZ小分子化合物组合诱导人胎盘成纤维细胞分化为上皮样细胞. 南方医科大学学报. 2025, 45(02): 322-330

基金

国家自然科学基金(82371382); 安徽省高校自然科学基金项目(2024AH040193,2024AH051296); 蚌埠医科大学大学生创新训练计划项目(bydc2024038)

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