目的 探究miR-654-3p对顺铂耐药的宫颈癌Hela/DDP细胞对顺铂敏感性的影响，并进一步分析其分子机制。方法 生物信息学预测TOP2A mRNA 3′-UTR的miR-654-3p潜在结合位点，双荧光素酶报告基因实验验证。RT-qPCR和Western blot方法检测Hela和Hela/DDP细胞中miR-654-3p和TOP2A表达情况以及过表达miR-654-3p对Hela/DDP细胞中TOP2A表达的影响。将TOP2A过表达质粒转染过表达miR-654-3p的Hela/DDP细胞，经顺铂处理后，CCK-8和流式细胞术分别检测Hela/DDP细胞的细胞活力和凋亡率。结果 TOP2A mRNA 3′-UTR存在miR-654-3p的潜在结合位点，且miR-654-3p与TOP2A mRNA 3′-UTR结合。Hela/DDP细胞中miR-654-3p表达水平较Hela细胞下调，TOP2A表达水平较Hela细胞上调。过表达miR-654-3p降低Hela/DDP细胞中TOP2A表达。过表达TOP2A逆转了过表达miR-654-3p对Hela/DDP细胞中TOP2A表达的下调作用。过表达miR-654-3p降低顺铂处理的Hela/DDP细胞的细胞活力，增加Hela/DDP细胞的凋亡率；过表达TOP2A逆转了过表达miR-654-3p对顺铂处理的Hela/DDP细胞的细胞活力的下调作用和凋亡率的上调作用。结论 MiR-654-3p通过靶向抑制TOP2A表达增加顺铂耐药的宫颈癌细胞对顺铂的敏感性。