党参皂苷对跨H9N2 AIV感染肺微血管内皮侵袭细胞功能的影响

乔畅, 刘翔, 冯波, 穆祥, 张涛, 董虹, 胡格, 张倩

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (08) : 1800-1806. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.08.29

党参皂苷对跨H9N2 AIV感染肺微血管内皮侵袭细胞功能的影响

  • 乔畅, 刘翔, 冯波, 穆祥, 张涛, 董虹, 胡格, 张倩
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摘要

为探讨党参皂苷对H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)感染引起机体免疫抑制的调控作用,首先应用不同质量浓度(5、10、20 mg/L)党参皂苷孵育大鼠肺微血管内皮细胞(rat pulmonary microvascular endothelial cells, RPMECs),采用RT-PCR和流式细胞术检测PD-L1表达水平变化,并以ELISA试剂盒检测上清液中TNF-α、IFN-γ、IL-10含量及空斑法检测上清液中H9N2 AIV的滴度。然后利用8μm孔径Transwell板建立RPMECs和T细胞共培养体系,以模仿循环T细胞跨过微血管迁移到病毒感染部位的过程。在Transwell上室中培养RPMECs,用H9N2 AIV接种RPMECs, 1 h后加入含20 mg/L党参皂苷的培养基,36 h后加入T细胞。作用8 h后,收集下室中的T细胞,用流式细胞仪检测CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例,用ELISA试剂盒检测上清液中IL-2、IFN-γ和Granzyme B的表达水平,流式细胞分选技术检测Perforin-1阳性T细胞的比例,MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒检测T细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI对T细胞染色后用流式细胞仪检测凋亡细胞的百分比。结果显示,党参皂苷可显著降低H9N2 AIV感染诱导的RPMECs中PD-L1的表达水平、IL-10及TNF-α表达量,降低T细胞凋亡率,但可显著提高跨内皮迁移T细胞中IL-2、IFN-γ、Perforin-1和Granzyme B的表达量及T细胞的增殖活性。结果表明,党参皂苷可显著抑制RPMECs中H9N2 AIV诱导的PD-L1的表达,增强跨内皮细胞层迁移T细胞的抗病毒功能,有利于增强宿主对H9N2 AIV抵抗能力。

关键词

党参皂苷 / 微血管内皮细胞 / PD-L1 / T细胞 / H9N2 AIV

中图分类号

S853.74

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乔畅, 刘翔, 冯波, 穆祥, 张涛, 董虹, 胡格, 张倩. 党参皂苷对跨H9N2 AIV感染肺微血管内皮侵袭细胞功能的影响. 中国兽医学报. 2024, 44(08): 1800-1806 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.08.29

基金

国家自然科学基金资助项目(2033202073/001)

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