检测寨卡病毒核酸的RT-LAMP可视化方法的建立

宋雨濛, 黄培, 金宏丽, 焦翠翠, 白玉洁, 张梦瑶, 龚志远, 李媛媛, 张海丽, 王化磊

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (08) : 1698-1703. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.08.16

检测寨卡病毒核酸的RT-LAMP可视化方法的建立

  • 宋雨濛, 黄培, 金宏丽, 焦翠翠, 白玉洁, 张梦瑶, 龚志远, 李媛媛, 张海丽, 王化磊
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摘要

为建立简单、便捷、灵敏、特异的寨卡病毒(Zika virus, ZIKV)快速检测方法,本研究通过对不同时间、不同地区分离的ZIKV全基因组序列进行分析,筛选ZIKV NS5基因保守区为靶标,同时设计特异性引物及探针,结合RT-LAMP恒温扩增技术和免疫层析技术,成功构建ZIKV反转录环介导等温扩增核酸可视化(RT-LAMP-VF)检测方法。结果显示,该方法具有良好的特异性和敏感性,当内、外、环引物比为FIP∶LF∶F3=4∶2∶1时,在61℃条件下恒温扩增45 min,可特异性检测到10~2 copies/μL的RNA标准品以及2.15 pfu的ZIKV,且与其他黄病毒(日本乙型脑炎病毒、猪瘟病毒)等无交叉反应。血液组织中的其他RNA不影响RT-LAMP-VF的敏感性和特异性,表明该方法可用于临床样本ZIKV的检测。本研究建立的ZIKV RT-LAMP-VF检测方法操作简单、不需要特殊仪器设备,尤其适用于基层单位ZIKV的现场快速检测,为ZIKV病的现场快速检测和预警预报体系的建立提供技术支持与物质保障。

关键词

寨卡病毒 / 环介导等温扩增 / 免疫层析试纸条 / 核酸可视化检测

中图分类号

S852.65

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宋雨濛, 黄培, 金宏丽, 焦翠翠, 白玉洁, 张梦瑶, 龚志远, 李媛媛, 张海丽, 王化磊. 检测寨卡病毒核酸的RT-LAMP可视化方法的建立. 中国兽医学报. 2024, 44(08): 1698-1703 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.08.16

基金

国家重点研发计划基金资助项目(2021YFF0703600)

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