接种疫苗是防御鸡马立克病的主要手段，但疫苗不能扼制马立克病病毒(MDV)的感染、增殖、传播以及毒力增强，因此，抑制MDV在鸡细胞内的增殖是增强疫苗防御效果的重要手段。本研究以MDV编码的大被膜蛋白MDV049为靶点，应用泛素探针从蛋白酶抑制剂库中筛选出一种化合物DUBs-IN-1,可抑制MDV049的酶活性。分子对接分析发现，DUBs-IN-1可以与MDV049的催化活性中心袋口处的7个残基互作，阻止泛素底物与活性中心的CYS98结合，进而抑制MDV049酶的活性。应用CEF细胞病变(CPE)模型研究发现，0.35、0.70μmol/L的DUBs-IN-1可显著抑制MDV所致的CPE,定量分析揭示DUBs-IN-1可显著抑制MDV在CEF细胞内的增殖(P<0.01)。应用感染MDV的鸡进行动物水平的研究发现，使用80和150μg/kg的DUBs-IN-1每日给药处理，DUBs-IN-1可显著抑制MDV在鸡T细胞内的增殖(P<0.01)。总之，本研究发现蛋白酶抑制剂DUBs-IN-1通过竞争性抑制方式抑制MDV049酶活性，并有效抑制MDV在鸡细胞内增殖，这一发现为研发抗MDV的药物奠定了理论基础。