边缘革蜱AQPs重组蛋白的表达及抗蜱效果

伍军, 何文文, 普浩, 金敏, 石文玉, 马爱军, 罗亭祥, 杨德鹏, 巴音查汗, 呼尔查

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (07) : 1466-1472+1506. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.07.16

边缘革蜱AQPs重组蛋白的表达及抗蜱效果

  • 伍军, 何文文, 普浩, 金敏, 石文玉, 马爱军, 罗亭祥, 杨德鹏, 巴音查汗, 呼尔查
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摘要

对边缘革蜱(Dermacentor marginatus)水通道蛋白(aquaporin, AQP)rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3纯化后免疫家兔,采血,进行Western blot和ELISA试验,第3次免疫2周后进行抗蜱试验。利用SDS-PAGE凝胶电泳筛选出rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3的最优表达条件,经HisSep Ni-NTA 6FF纯化柱将3种重组蛋白纯化,家兔分4组,每组3只家兔,对照组1组,免疫组3组。纯化的3种重组蛋白分别单独免疫3组家兔,在0、14、21 d分别进行1次免疫,每隔7 d采血1次,制备多克隆抗体,Western blot检测其反应原性,用ELISA检测其抗体效价,待抗体效价升高后开展攻蜱试验。结果显示,rDmAQP1的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃诱导8 h; rDmAQP2的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃诱导7 h; rDmAQP3的最优表达条件是IPTG浓度为1.0 mmol/L、37℃条件下诱导5 h。Western blot结果显示rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3都具有一定的反应原性。ELISA结果显示rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3免疫家兔的抗体效价分别为:1∶409 600、1∶512 00和1∶409 600,rDmAQP1蛋白免疫后总的抗蜱效果为79.74%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为9.43%、25.17%和63.81%;rDmAQP2蛋白免疫后总的抗蜱效果为78.78%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为8.30%、20.14%和68.26%;rDmAQP3蛋白免疫后总的抗蜱效果为87.91%,对边缘革蜱的平均饱血蜱质量、平均卵质量及平均卵孵化率的抑制率分别为3.23%、22.47%和80.50%。本研究通过血清学试验及抗蜱试验,发现rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3都具有抗蜱疫苗候选抗原潜力,其中rDmAQP3的免疫效果最佳,为rDmAQP1、rDmAQP2和rDmAQP3功能研究奠定了基础。

关键词

边缘革蜱 / 水通道蛋白 / 多克隆抗体的制备 / 抗蜱效果评价

中图分类号

S852.7

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伍军, 何文文, 普浩, 金敏, 石文玉, 马爱军, 罗亭祥, 杨德鹏, 巴音查汗, 呼尔查. 边缘革蜱AQPs重组蛋白的表达及抗蜱效果. 中国兽医学报. 2024, 44(07): 1466-1472+1506 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.07.16

基金

上海合作组织科技合作伙伴计划资助项目(2021E01001)

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