为建立鸭腺病毒3型(duck adenovirus 3,DAdV-3)一种基于SYBR Green I染料的荧光定量PCR诊断方法，本试验根据DAdV-3基因组序列中相对保守的Fiber-2基因，通过普通PCR扩增，构建pMD19-Fiber2重组质粒为阳性标准品，在此基础上设计合成特异性引物进行实时荧光定量PCR方法的建立，对其灵敏性、特异性和重复性进行评价，并初步应用于临床样本检测。结果显示，针对DAdV-3的Fiber-2基因建立的SYBR Green I荧光定量PCR检测方法线性关系良好，相关系数0.998 9;检测DAdV-3的灵敏度为3.6×10~(2 )copies/μL,敏感性比普通PCR检测方法高100倍；该方法对鸭腺病毒1型、鸭疫里默杆菌等其他常见病原均无交叉扩增反应，批内、批间变异系数均小于5%;临床样本检测与普通PCR符合率100%。以上结果表明，所建方法特异性强、敏感性高且重复性好，适用于临床检测，该方法可为DAdV-3的临床诊断、流行病学调查以及防控提供技术支持。