为查明昆明地区某奶牛场致犊牛腹泻细菌性病原及其生物学特征，对腹泻犊牛粪便进行细菌分离培养、生化试验和16S rRNA序列分析以鉴定细菌种类，并对分离菌株进行致病性试验、血清型鉴定、毒力基因检测、药敏试验、耐药基因检测和种群分型鉴定。结果显示，从腹泻犊牛粪便中共分离鉴定4株强致病性的大肠杆菌，O3、O4、O103为优势血清型；4株致病性大肠杆菌对庆大霉素、头孢唑林、氯霉素、环丙沙星、诺氟沙星均表现强耐药性，而对丁胺卡拉表现为中度敏感；分离菌株携带blaOXA、blaTEM、aac(6′)-Ib、oqxAB、aadA1共5种耐药基因及fimH、Crl、iucD、astA、hlyE、ompA、ompC、K88、papC等9种毒力基因，且4株致病菌均为B2型大肠杆菌。结果表明，导致昆明地区某奶牛场犊牛腹泻的病原为B2型致病性大肠杆菌，并对临床上常见的抗生素表现较强的耐药性，且携带多种耐药基因与毒力基因。本研究为该奶牛场犊牛腹泻选择有效的治疗药物提供了参考依据。