目的 研究外耳道真菌病的真菌菌种分布，探讨多重PCR技术检测和鉴定外耳道真菌病常见真菌菌种的方法。方法 取2022年3月—2023年6月就诊于荆州市中心医院耳鼻咽喉科门诊的137例外耳道真菌病患者外耳道标本，采用改良的马丁固体培养基对同一标本的一部分进行了常规培养，培养后提取DNA,PCR扩增及测序鉴定真菌菌种。同时，该标本另一部分直接经DNA提取后，行两次多重PCR,分别使用通用真菌引物和特异性真菌引物，根据琼脂糖凝胶电泳得到的条带的长短可鉴定真菌菌种。结果 通过传统方法和多重PCR技术行真菌菌种鉴定，本地区137例外耳道真菌病患者曲霉菌共128株(93.4%),其中土曲霉73株、黄曲霉24株、黑曲霉18株和烟曲霉13株；念珠菌共9株(6.6%),均为白念珠菌。传统方法需4～7 d,而多重PCR技术6～8 h即可鉴定真菌菌种，对比两组方法结果，符合率为100%。结论 本地区外耳道真菌病患者最常见的真菌菌种是曲霉菌和念珠菌。除了常见菌种，多重PCR技术还可以鉴定高耐药和高致死率的耳念珠菌、近平滑念珠菌等罕见菌种。与传统方法相比，多重PCR技术检测和鉴定外耳道真菌病具有快速、准确等优点，值得临床推广。