本氏烟NbGAD1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

陈龙发, 李凯楠, 王晓雯, 曹梦瑶, 陈曜, 朱峰

扬州大学学报(农业与生命科学版) ›› 2024, Vol. 45 ›› Issue (02) : 128-133. DOI: 10.16872/j.cnki.1671-4652.2024.02.015

本氏烟NbGAD1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

  • 陈龙发, 李凯楠, 王晓雯, 曹梦瑶, 陈曜, 朱峰
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摘要

γ-氨基丁酸(GABA)作为一种非蛋白质氨基酸,普遍存在于植物体内,在植物生长发育和抗胁迫方面发挥着重要作用。谷氨酸脱羧酶(GAD)是合成GABA的关键蛋白酶,目前关于GAD介导GABA调控植物防御病毒侵染的分子机制尚不清楚。利用RT-PCR克隆本氏烟NbGAD1基因,并与原核表达载体pET-28a连接,构建重组载体pET-28a-NbGAD1,诱导产生重组蛋白,经Ni-NTA柱纯化蛋白后免疫新西兰白兔,最终获得抗血清。结果表明:成功构建原核表达载体pET-28a-NbGAD1,经大肠埃希菌诱导纯化后获得分子量约57 ku的重组蛋白NbGAD1。免疫制备的抗血清经Western blot检测显示,抗血清效价达1∶100 000,抗血清稀释2 000倍仍能检测到浓度为0.005 mg·mL-1的重组蛋白,且能检测到本氏烟中内源表达的NbGAD1蛋白,说明该抗血清特异性强、灵敏度高,为今后深入探究GAD在植物病毒侵染过程中的作用机制奠定了基础。

关键词

本氏烟 / γ-氨基丁酸 / 谷氨酸脱羧酶 / 原核表达 / 抗血清制备

中图分类号

S432.2 / Q943.2

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陈龙发, 李凯楠, 王晓雯, 曹梦瑶, 陈曜, 朱峰. 本氏烟NbGAD1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备. 扬州大学学报(农业与生命科学版). 2024, 45(02): 128-133 https://doi.org/10.16872/j.cnki.1671-4652.2024.02.015

基金

江苏省自然科学基金面上项目(BK20201431); 江苏省农业科技自主创新资金项目[CX(20)3128]; 扬州大学高端人才支持计划项目(2021-08)

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