目的 筛选模拟失重效应下血管内皮细胞中琥珀酰化修饰差异蛋白，并进一步验证其在模拟失重效应下的修饰水平。方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），收集对照组和模拟失重6 h及48 h组细胞样本，提取细胞沉淀，通过分离纯化细胞，采用串联质量标签标记、高效液相色谱分析技术、酰化肽片段富集和质谱定量分析等方法，进一步对模拟失重效应下HUVECs中发生差异性琥珀酰化修饰的蛋白进行组学研究，采用CO-IP技术对筛选出的蛋白及其差异修饰位点做进一步验证。结果 模拟失重效应下HUVECs的琥珀酰化修饰组学分析中存在显著性差异蛋白（P<0.05)；在细胞中，差异修饰蛋白主要富集于线粒体及内质网中。模拟失重48 h后HUVECs中PDIA4琥珀酰化修饰水平高于地面正常重力组（P<0.05），差异具有统计学意义；对照组中PDIA4多个蛋白位点的琥珀酰化修饰水平均低于模拟失重效应组（P<0.05,P<0.01)。结论 模拟失重效应可引起血管内皮细胞蛋白的琥珀酰化修饰水平发生显著改变，PDIA4存在多个琥珀酰化差异修饰位点。