目的 设计一种检测早期乳腺癌筛查肿瘤标志物microRNA-21(miRNA-21)的Cy5光学茎环DNA分子信标探针，构建引物堆叠的等温循环链置换荧光定量分析方法，实现对miRNA-21的高灵敏检测。方法 设计Cy5光学标记的茎环hairpinDNA (hDNA)探针，在靶标miRNA-21的配对引发下，激活等温循环链置换扩增反应，采用荧光定量分析方法，优化实验用量，对miRNA-21进行灵敏度、特异度检测，并与反转录荧光定量PCR(qRT-PCR)方法检测结果进行比较。结果 本研究设计的Cy5光学hDNA探针构建的等温循环链置换扩增反应，可对miRNA-21进行高灵敏度检测，其检测限可低至1 fmol/L;检测miRNA-21特异度良好，且不与其他miRNA反应产生荧光，能有效实现单碱基突变miRNA的区分；检测miRNA-21结果与金标准qRT-PCR检测结果的差异无统计学意义(P>0.05),证明本探针检测结果具有可信性。结论 本研究设计的Cy5光学探针检测miRNA-21的灵敏度和特异度高，可实现对早期乳腺癌患者的筛查及诊断。