真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达

王程, 冯爱露, 陈韦璁, 李龙飞, 石玥, 吴金霞

徐州医科大学学报 ›› 2022, Vol. 42 ›› Issue (01) : 51-56.

真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达

  • 王程, 冯爱露, 陈韦璁, 李龙飞, 石玥, 吴金霞
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摘要

目的构建Apobec-1互补因子(A1CF)真核表达质粒,转染肺癌细胞A549和H1299并检测其表达。方法提取肾癌细胞786-o中总RNA,经RT-PCR扩增人A1CF基因,通过酶切法插入pcDNA3.1(+)载体,构建pcDNA3.1(+)-A1CF真核表达质粒,经BamHI和XbaI双酶切及DNA序列测序鉴定。Lipofectamine 2000脂质体转染肺癌细胞,Western blot法检测A1CF在肺癌细胞中的表达情况。划痕和Transwell小室实验观察A1CF对肺癌迁移侵袭能力的影响。结果酶切及测序结果显示pcDNA3.1(+)-A1CF中插入的片段序列测定结果与人A1CF序列一致,重组质粒转染两种肺癌细胞后,转染组的目的蛋白表达量明显增高,且E-cadherin和P-ERK表达水平也明显增高(P<0.05)。结论成功克隆人A1CF基因cDNA,并构建真核表达质粒。A1CF促进肺癌细胞迁移侵袭可能与ERK的磷酸化有关。

关键词

Apobec-1互补因子 / 重组质粒 / 侵袭 / 肺癌 / ERK

中图分类号

R734.2

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王程, 冯爱露, 陈韦璁, 李龙飞, 石玥, 吴金霞. 真核表达质粒pcDNA3.1(+)-A1CF的构建及在肺癌中的表达. 徐州医科大学学报. 2022, 42(01): 51-56

基金

国家自然科学基金(81802529); 中国博士后基金(2015M581865); 江苏省博士后基金(1501053C); 江苏省大学生创新创业训练计划项目(201910313107H); 基础医学国家级实验教学示范中心(徐州医科大学)资助项目

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