2024年, 第40卷, 第06期　
刊出日期：2024-06-25

  

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  白藜芦醇促进分子伴侣介导的自噬减轻神经炎症改善脓毒症相关性脑病小鼠情感功能障碍

  李晓勤, 孟昭君, 何晓兰, 王嘉炜, 杨琳, 方宗平

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 481-487. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009793

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  目的 明确分子伴侣介导的自噬(CMA)减轻脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠情感功能障碍的作用。方法 通过盲肠结扎穿孔术(CLP)构建SAE小鼠模型，采用小鼠脓毒症严重程度评分(MSS)评估小鼠脓毒症的严重程度，并进行旷场和高架十字迷宫相关行为学实验检测SAE小鼠的情感功能。Western blot法检测热休克蛋白同源蛋白70(HSC70)、溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白表达水平，免疫荧光组织化学染色检测LAMP2A与神经元的共定位情况。ELISA检测炎症因子白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的释放水平。同时按30 mg/kg剂量每天连续给予白藜芦醇灌胃直至第14天。结果 CLP小鼠14 d死亡率为45.83%,而幸存小鼠均存在情感功能障碍。CLP术后24 h海马神经元HSC70和LAMP2A表达水平显著降低，HMGB1表达水平以及炎症因子IL-6和TNF-α释放增加，CMA活性受损，而在灌胃给予白藜芦醇后，HSC70和LAMP2A表达水平增加，HMGB1表达水平降低，炎症因子释放减少，提示CMA活性提高且神经炎症减轻，行为学测试结果表明在给予小鼠白藜芦醇灌胃后小鼠情感功能障碍得到改善。结论 SAE小鼠海马神经元CMA活性显著降低，导致情感功能障碍；白藜芦醇能够促进CMA,从而抑制HMGB1的表达和炎症因子的释放，减轻神经炎症，从而改善SAE小鼠的情感功能障碍。
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  糖尿病肾脏病免疫相关转录因子的生物信息学分析

  刘莉, 杨娇娇, 任建民

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 488-493. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009822

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  目的 通过生物信息学方法分别对糖尿病肾病(DKD)患者肾小球与肾小管病变的转录组学进行分析，筛选关键的免疫相关转录因子。方法 下载基因表达数据集(GEO)数据库GSE30528、 GSE30529数据集与Karolinska肾脏研究中心转录组测序(RNA-seq)数据集。通过基因集富集分析(GSEA)明确DKD肾小球与肾小管免疫基因表达有无差异。应用R软件limma包和DEseq2包分别对芯片数据及RNA-seq数据进行差异分析，提取其中差异表达的免疫基因及转录因子，通过共表达分析获取免疫相关转录因子。应用蛋白质相互作用的STRING数据库及Cytoscape软件构建转录因子与免疫相关基因的蛋白质互相作用网络(PPI)。最后通过肾基因表达分析工具Nephroseq数据库分析关键的免疫相关转录因子与临床病理参数的相关性。结果与正常对照组织相比，DKD肾小球和肾小管组织免疫基因有明显的表达差异。通过差异分析及共表达分析方法，肾小球转录组共得到50个免疫基因及9个免疫相关转录因子；肾小管转录组共得到131个免疫基因及41个免疫相关转录因子。PPI网络中，肾小球关键的免疫相关转录因子为干扰素调节因子8(IRF8)、乳运铁蛋白(LTF)、 CCAAT/增强子结合蛋白α(CEBPA)、 Runt相关转录因子3(RUNX3),肾小管关键的免疫相关转录因子为FBJ小鼠骨肉瘤病毒癌基因同源蛋白B(FOSB)、核受体亚家族4A组成员1(NR4A1)、 IRF8与信号转导子及转录激活子1(STAT1),以上转录因子均与肾小球滤过率(GFR)呈显著相关性。结论 生物信息学分析获得了DKD发病与免疫调节异常相关的可能基因，进一步验证这些基因的表达及功能有助于DKD的免疫治疗研究。
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  诃子水提物通过上调PD-1/PD-L1表达调节胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠脾脏中细胞的细胞免疫减轻关节炎症

  吴茜, 徐娥娥, 董家博, 全嘉运, 杨潇

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 494-500. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009671

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  目的 研究诃子水提取物(TCWE)对胶原蛋白诱发关节炎(CIA)大鼠细胞免疫及程序性死亡蛋白1/程序性死亡蛋白1配体1(PD-1/PD-L1)通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、 CIA组、 TCWE处理组、甲氨蝶呤(MTX)处理组，每组15只。除对照组外，其余各组SD大鼠皮下注射Ⅱ型胶原蛋白制备胶原蛋白诱发关节炎(CIA)模型，TCWE组大鼠采用[20 mg/(kg·d)] TCWE处理，MTX组大鼠采用[1.67 mg/(kg·d)]MTX处理。处理14 d后，通过HE染色检查软骨形态，流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞凋亡和调节性T细胞(Treg)/Th17细胞比率，反转录PCR检测脾脏中的维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)和叉头盒转录因子P3(FOXP3)、 PD-1和PD-L1的mRNA表达，免疫组织化学染色检测RORγt、 FOXP3的表达和定位。Western blot法检测脾脏淋巴细胞的PD-1和PD-L1的蛋白表达，ELISA检测大鼠血清白细胞介素17(IL-17)和转化生长因子β(TGF-β)水平。结果 与CIA组相比，TCWE组和MTX组的软骨和滑膜病变明显减轻，脾脏中的T淋巴细胞凋亡率增加，Treg/Th17细胞比率上调，RORγt的表达降低，FOXP3、 PD-1和PD-L1的表达增加。血清IL-17水平降低，血清TGF-β水平升高。结论 TCWE处理可能激活脾脏细胞的PD-1/PD-L1通路调节CIA大鼠脾脏中细胞的细胞免疫，减轻软骨损伤。
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  黄芪甲苷Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路增加Th1/Th2细胞比率减轻IgA肾病小鼠肾损伤

  王晓亮, 谭鹏, 孔维信

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 501-507. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009795

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  目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(AS-Ⅳ)对IgA肾病(IgAN)小鼠1型辅助T(Th1)细胞/Th2细胞平衡的影响及其可能作用机制。方法 建立BALB/c小鼠IgAN模型，造模成功小鼠随机分为模型组、 AS-Ⅳ低、中和高剂量组各10只，另设对照组10只。AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠灌胃(12.5、 25、 50)mg/kg AS-Ⅳ混悬液(生理盐水配制),对照组及模型组给予等量生理盐水。测定各组小鼠24 h尿蛋白(24 hUPr)含量和尿红细胞计数；测定小鼠血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)和白蛋白(ALB)水平；ELISA检测各组小鼠血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和IL-10水平；流式细胞术检测小鼠外周血Th1/Th2细胞比率；HE染色观察小鼠肾组织病理学变化；反转录PCR和Western blot法分别检测小鼠肾组织中T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域1(TIM-1)、 Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白表达。结果 与模型组比较，AS-Ⅳ低、中和高剂量组小鼠第12周和第15周尿红细胞计数、 24 h UPr、 BUN、 Scr、 IL-4、 IL-10水平、 Th2细胞比例、 TIM-1与TLR4 mRNA和蛋白表达水平均明显降低，ALB、 IFN-γ水平、 Th1细胞比例和Th1/Th2细胞比率升高，且以AS-Ⅳ高剂量组效果最佳。结论 AS-Ⅳ通过抑制TIM-1信号通路，增加Th1/Th2细胞比率，抑制炎症反应，减轻IgAN小鼠肾损伤。
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  肝细胞癌组织核孔蛋白85(NUP85)高表达与免疫细胞浸润及预后相关性分析

  刘新宇, 丁泽邦, 吴焕, 马俊杰, 陆进

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 508-519. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009797

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  目的 探究核孔蛋白85(NUP85)在肝细胞癌(HCC)中的表达意义及免疫相关性分析。方法 综合利用多种在线数据库分析NUP85在HCC中的mRNA表达、蛋白表达以及突变情况，并进行预后诊断价值分析；采用单细胞测序数据及肿瘤免疫评估资源(TIMER)和基因表达谱交互作用分析2021(GEPIA2021)数据库分析NUP85的免疫相关性；利用基因组癌症分析(GSCA)和临床生信之家分析NUP85的药物敏感性；通过肝细胞癌综合分子数据库(HCCDB)筛选NUP85在HCC中的共表达基因，并利用R语言“limma包”分析NUP85及其相关基因的相关性；再利用R语言“clusterProfiler包”分析NUP85及其相关基因的基因本体论(GO)功能注释、京都基因与基因组百科全书(KEGG)以及基因集富集分析(GSEA);利用临床生信之家对NUP85及其相关基因进行列线图和预后风险评分模型的构建。结果 NUP85的mRNA和蛋白质在HCC中表达上调，在不同分期和分级均高表达，不利于患者预后；而其在HCC样本中突变率是19%,显著影响患者的总生存期(OS)、疾病特异性生存(DSS)以及无进展生存(PFS),且其在巨噬细胞、 B细胞、 T细胞等多种免疫细胞中高表达并与多种免疫细胞浸润水平呈正相关；此外，NUP85的表达与米尔达美替尼(PD0325901)、维莫非尼的结构类似物(PLX4720)和瑞法替尼(PD0325901)等多用药物具有显著相关性。NUP85及其共表达基因的GO功能主要富集在细胞器裂变、核分裂和染色体分离等，KEGG通路主要富集在细胞周期和运动蛋白等，并显著不利于HCC患者OS,且对HCC患者1年、 3年和5年OS预后诊断的ROC曲线下面积AUC均大于0.7。结论 NUP85高表达HCC患者预后差，并与多种免疫细胞和药物相关，可作为HCC诊断、治疗和预后的生物标志物。
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  维生素D3通过增强肝组织维生素D受体活性阻断JAK/STAT3通路减轻高胆固醇血症小鼠幽门螺杆菌感染相关胃炎

  徐文娇, 王丽萍, 杨利娟, 李向妮, 李昌平, 刘保民

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 520-526. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009781

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  目的 探讨维生素D3(VD3)能否通过降低血脂抑制Janus激酶/信号转导子与转录激活子3(JAK/STAT3)信号通路从而减轻幽门螺杆菌(Hp)感染。方法 建立高胆固醇小鼠模型和Hp感染小鼠模型，采用VD3灌胃8周。采用实时定量PCR检测小鼠肝组织维生素D受体(VDR)、胰岛素诱导基因2(Insig-2)及小鼠胃组织胃泌素的mRNA表达，Western blot法检测胃组织JAK、STAT3、环加氧酶2(COX2)蛋白的表达，生化分析法检测小鼠血清胆固醇水平，ELISA检测各组小鼠血清白细胞介素6(IL-6)及IL-8水平，HE染色小鼠肝组织及胃组织的病变情况。结果 高胆固醇组及高胆固醇联合Hp感染组小鼠在灌胃VD3后，小鼠肝组织VDR、Insig-2的水平明显上升，胃泌素水平表达降低；胃组织JAK、STAT3及COX2蛋白的表达降低，血清中胆固醇水平降低，IL-6水平无明显变化，IL-8水平降低；与对照组相比，高胆固醇联合Hp感染组肝细胞气球样变减少，胃组织炎症减轻，胆固醇组、Hp感染组胃组织炎症也减轻。结论 VD3通过增强肝组织VDR的活性，阻断JAK/STAT3信号通路，抑制炎症因子表达减轻胃炎的程度。
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  载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠整装（whole-mount）主动脉免疫荧光组织化学染色的血管外膜淋巴管成像

  何玉莲, 钟文飞, 林彩燕, 李玉婷, 冯森玲, 严鹏科

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 527-531. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009789

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  目的 探索载脂蛋白E敲除(ApoE^-/-)小鼠整装（whole-mount）主动脉免疫荧光组织化学染色法显示血管外膜淋巴管的可行性。方法 制备ApoE^-/-小鼠整装主动脉，进行淋巴管内皮受体1（LYVE1）、 α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）免疫荧光组织化学染色，染色后组织经5 g/L苏丹黑B处理30 min、组织透明液透明，移至自制的样本容器中，荧光显微镜下成像。结果经5 g/L苏丹黑B处理的整装主动脉可见血管自发荧光显著降低，外膜淋巴管的特异性荧光强度显著增强，更易观察且不会对其他通道荧光产生干扰。结论 建立的ApoE^-/-小鼠整装主动脉免疫荧光组织化学染色显示血管外膜淋巴管的方法操作简便，特异性好。
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  高表达抗β2糖蛋白I(β2GPI)自身抗体可加重结缔组织病炎症程度及免疫功能紊乱

  万磊, 刘健, 黄传兵

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 532-537. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009676

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  目的 观察抗β2糖蛋白I(β2GPI)自身抗体在结缔组织病表达及其与炎症及免疫功能的关系。方法 观察对象为广义结缔组织病患者，包括结缔组织病(CTD)、类风湿性关节炎(RA)、干燥综合征(SS)和系统性红斑狼疮(SLE)。采用化学发光法进行定量检测抗β2GPI。采用魏氏法检测血沉(ESR),采用全自动生化分析仪检测C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)和抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体。结果 RA患者抗β2GPI抗体及其亚型较CTD、 SS、 SLE患者均明显升高。结缔组织病患者中CRP与抗β2GPI抗体、抗β2GPI抗体IgM呈正比。ESR与抗β2GPI抗体呈正比。与CRP正常组比较，CRP异常组抗β2GPI抗体、抗β2GPI抗体IgM升高。与ESR正常组比较，ESR异常组抗β2GPI抗体、抗β2GPI抗体IgG升高。RA患者中抗β2GPI抗体与ESR、抗CCP抗体呈正相关。抗β2GPI抗体IgG与RF呈正相关。结论 抗β2GPI抗体水平可作为结缔组织病炎症程度和评估免疫紊乱的一个预测因子。
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  敲低长链非编码RNA H19(lncRNA H19)促进人结肠细胞自噬抑制脂多糖诱导的凋亡

  陈瑞, 张燕飞, 王军华, 陶明华, 冉剑涛, 杨杰, 王孜, 潘丽, 韩起

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 538-543. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009729

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  目的 探讨lncRNA H19在溃疡性结肠炎(UC)患者中的表达水平及其在UC中的作用。方法 收集西藏军区总医院25名UC患者和25名健康体检者的结肠黏膜标本及血清标本，采用荧光定量PCR检测lncRNA H19表达水平，并对血清标本进行受试者工作特征(ROC)曲线分析。采用脂多糖(LPS)处理建立体外HT29结肠细胞炎性模型，并采用荧光定量PCR检测lncRNA H19在结肠细胞的表达。通过慢病毒技术构建lncRNA H19低表达的HT29细胞株，噻唑蓝(MTT)法检测HT29细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡率，Western blot法检测凋亡和自噬蛋白表达情况。采用自噬激动剂雷帕霉素处理后，MTT法观察对HT29细胞存活的影响。结果 lncRNA H19在UC患者结肠黏膜组织和血清中高表达，ROC曲线下面积为0.786。LPS刺激后，HT29细胞lncRNA H19表达显著升高，并与刺激时间正相关。敲低lncRNA H19可促进HT29细胞存活并抑制细胞凋亡，促进细胞自噬水平增加；雷帕霉素处理后，细胞存活率明显升高。结论 敲低lncRNA H19促进结肠细胞自噬抑制LPS诱导的结肠细胞凋亡并促进其存活。
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  直接抗球蛋白试验阳性患者血清Rh血型抗体鉴定分析

  江涛, 杜娟, 杨世明, 杨琳, 涂倩, 程博娜, 高朗雯, 霍喜艳

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 544-548. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009796

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  目的 对直接抗球蛋白试验(DAT)阳性患者血清中存在Rh血型不规则抗体的特异性鉴定结果及其输注血液类型的选择进行分析。方法 对患者血标本采用试管生理盐水法(NS)、间接抗球蛋白试验(IAT)和微柱凝集试验(MGT)进行ABO、 Rh血型鉴定，不规则抗体筛选及特异性鉴定。并对患者进行红细胞相应血型抗原检测、 DAT和相应血型抗原阴性红细胞对DAT阳性患者红细胞放散液的吸收放散试验。采用不同方法对患者与献血者血液进行交叉配血试验，选择同型及配合性输血治疗。结果 采用谱细胞进行抗体特异性鉴定，相应血型抗原检测和吸收放散试验验证，在27例DAT阳性患者中检出Rh抗E抗体15例、抗CD抗体2例、抗Ce抗体7例、抗Ec抗体3例，抗体效价为4～16。其中7例DAT阳性患者红细胞放散液既能吸收相应血型抗原阳性红细胞，也能吸收相应血型抗原阴性红细胞，确认为类Rh特异性自身抗体，即类抗E抗体2例、类抗Ce抗体3例、类抗Ec抗体2例，类Rh抗体患者相应血型抗原为阳性。对血清中存在Rh同种抗体和类Rh抗体需要输血治疗的患者输注不含相应抗原的血液，无溶血性输血不良反应。结论 Rh同种抗体和类Rh抗体均可引起溶血性输血反应和交叉配血不合。输注不含相应抗原的血液，可提高输血疗效和输血安全。
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  人源抗c-Met单链抗体腹腔注射可抑制A549肺腺癌荷瘤小鼠移植瘤生长

  安然, 刘明珠, 张露, 彭上, 甄翔程, 闵静婷, 李正红

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 549-555. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009806

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  目的 该实验旨在验证间质上皮转化单链抗体(Met scFv)在体内对皮下移植瘤裸鼠的抗肿瘤作用。方法 建立裸鼠肿瘤模型，皮下注射A549肺腺癌细胞，成瘤后通过腹腔注射IRDye680 LT N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)酯标记的Met scFv,借助小动物成像仪进行实时监测以观察该抗体在荷瘤小鼠体内的动态分布情况，检测肿瘤组织细胞c-Met与抗体的亲和力，定期尾静脉注射Met scFv,观察肿瘤体积变化并绘制肿瘤生长曲线。免疫组织化学染色法检测Met scFv是否能有效结合肿瘤组织中的c-Met抗原。结果 裸鼠体内分布结果表明，在最初的3 h内，Met scFv主要分布于腹腔内。经过大约48 h,荧光信号开始在肿瘤组织中聚集。瘤体免疫组织化学染色结果显示，肿瘤组织中c-Met高表达；定期尾静脉注射Met scFv,可使小鼠瘤体生长明显减缓。结论 Met scFv在体内特异性识别肿瘤细胞且表现出显著的抗肿瘤活性。
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  静息与感染状态下巨噬细胞和经典树突状细胞的发育及功能研究进展

  张蕾, 崔洁, 梁尹攀, 张欢欢, 伊淑莹

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 556-560. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009703

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  巨噬细胞(MAC)和经典树突状细胞(cDC)是免疫防御的首要防线，在先天免疫和适应性免疫中扮演着重要角色，它们具有高度组织特异性，能够精确的适应环境变化。MAC在维持组织稳态和免疫监视方面发挥作用，而cDC作为最有效的抗原提呈细胞，在免疫应答中起关键作用。这两种细胞类型之间也存在相似性和相互联系，MAC和cDC都能识别病原体和组织损伤，它们通过分泌细胞因子激活其他先天免疫细胞，并通过与T细胞的相互作用启动或调节适应性免疫。本文总结了静息与感染过程中MAC及cDC的发育及功能的研究进展，阐述了它们在免疫系统中的关系和相互作用，为疾病的深入研究提供了理论基础。
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  巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)在肿瘤免疫应答过程中的研究进展

  谢小青, 刘亚贤, 王俊科, 卢利霞, 洪金鹏, 陈嘉屿, 于晓辉

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 561-565. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009725

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  巨噬细胞迁移抑制因子(MIF)作为一种促炎和致癌的多效性细胞因子，在多种恶性肿瘤中高表达，招募肿瘤细胞或免疫细胞至肿瘤微环境中。MIF通过改变肿瘤微环境、影响肿瘤的发生。在肿瘤的发生过程中，MIF不仅在免疫应答过程中发挥抗炎作用，还可诱导免疫逃避和免疫耐受，促进肿瘤的发生。这与在肿瘤免疫应答过程中发挥作用的免疫细胞密不可分，主要包括自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、树突状细胞、 B细胞、 T细胞及骨髓来源的抑制细胞等。本文总结了MIF在肿瘤免疫应答过程中的作用以及与恶性肿瘤发生与发展的关系，以期为肿瘤的治疗提供新的思路和可能的治疗方案。
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  IL-38在神经炎症中的作用机制研究进展

  马港国, 罗振国, 高昌俊

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 566-570. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009742

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  白细胞介素38(IL-38)作为IL-1家族中的一种新型细胞因子，在机体中广泛表达，具有重要免疫调节功能。IL-38既能够通过抑制IL-36受体(IL-36R)表达进而阻遏其下游的核因子κB(NF-κB)通路，抑制小胶质细胞激活，减少促炎细胞因子的产生；还能通过干扰含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)的组装和活性来调控巨噬细胞极化。此外，IL-38还具有调控血管内皮生长因子(VEGF)功能，对于缺血性脑卒中损伤血管的清除发挥重要作用。本文总结了IL-38在不同中枢神经疾病中的作用机制。
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  科研反哺在医学免疫学教学中的实践与探索

  张溪洋, 孙元杰, 杨舒雅, 姜东伯, 杨琨

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(06): 571-574. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009785

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  医学免疫学是连接基础实验与临床应用的重要纽带，更是多种前沿学科的交叉点。目前免疫学教学中仍存在教学方式单一和学生科研训练不足等局限性。空军军医大学基础医学院免疫学教研室在免疫学课程中对科研反哺教学进行实践探索，利用科研思维引领教学活动，通过科研平台支撑教学实践，增添科研进展丰富教学内容，设置科研活动激发学生兴趣，增加学生内驱力，提升教学效果，实现教学与科研“双赢”,也为培养能够肩负国之重任的医学创新人才提供助力。