2024年, 第40卷, 第05期　
刊出日期：2024-05-25

  

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  汉滩病毒(HTNV)感染正常人肺上皮细胞及其固有免疫与代谢改变

  丁亚鑫, 侯诗源, 孙丹妮, 康华瑞, 马晓晗, 刘梓谕, 刘蓉蓉, 吴兴安

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 385-394. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009752

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  目的 确定汉滩病毒(HTNV)可感染BEAS-2B正常人肺上皮细胞并通过转录组分析HTNV感染诱导的宿主免疫应答和代谢改变。方法 采用蛋白免疫印迹、实时荧光定量PCR和免疫荧光实验检测BEAS-2B细胞内的病毒载量，并使用RNA测序技术进行转录组分析。结果 在HTNV感染的BEAS-2B细胞中，HTNV核衣壳蛋白(NP)和小片段(S)表达均随时间增加。对HTNV感染BEAS-2B细胞48 h的转录组数据分析，得到328个差异基因，基因本体论(GO)富集及京东基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析发现其差异主要集中在干扰素应答及固有免疫模式识别受体相关通路。通过蛋白质互作网络分析发现多个固有免疫应答相关基因，此外筛选到4个编码去整合素和具有血小板反应蛋白基序的金属蛋白酶的基因。通过对代谢通路分析发现3个与萜类骨架生物合成相关的基因，2个与糖酵解/糖异生相关基因和2个类固醇激素生物合成相关基因。此外，差异基因的亚细胞定位分析表明多个差异基因位于线粒体。结论 HTNV能有效感染BEAS-2B细胞，可作为体外HTNV感染人肺上皮的细胞模型。生物信息学方法筛选的HTNV感染相关的差异基因及代谢通路，可为研究HTNV感染的分子机制提供理论依据。
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  线粒体内膜蛋白17（MPV17）通过阻断ERK通路抑制铁过载小鼠脾脏CD3⁺T细胞铁死亡

  徐涛, 井文君, 陈贵兰

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 395-403. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009748

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  目的 探索铁过载对小鼠脾脏损伤的影响及线粒体内膜蛋白17（MPV17）在铁过载小鼠脾脏CD3⁺ T细胞铁死亡中的作用。方法 将小鼠随机分为正常饮食组、高铁饮食组、高铁饮食联合铁死亡抑制剂ferrostatin-1（Fer-1）处理组、高铁饮食联合MPV17腺病毒注射组，每组5只。喂食8周后，取脾脏组织并固定，通过组织切片和HE染色法观察脾脏结构，碘化丙啶（PI）染色检测脾脏CD3⁺ T细胞死亡，脂质过氧化荧光探针C11 BODIPY 581/591检测脂质氧化，实时定量PCR检测溶质载体家族7成员11（SLC7A11）及前列腺素内过氧化物合成酶2（PTGS2） mRNA水平，流式细胞术检测M1、 M2巨噬细胞比例，ELISA实验检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）及IL-6的含量。同时增加高铁饮食联合细胞外信号调节激酶（ERK）抑制剂处理组、 ERK激活剂处理组、 β半乳糖苷（β-gal）酶联合ERK激活剂处理组、 MPV17联合ERK激活剂处理组，Western blot法检测MPV17、谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）、磷酸化的ERK（p-ERK）水平，JC-1结合流式细胞术检测线粒体膜电位。结果与正常饮食组相比，高铁饮食组小鼠脾脏红髓形状不规则，白髓结构消失，脾脏CD3⁺ T细胞死亡增多，脂质过氧化物增多，SLC7A11及PTGS2表达升高，血液中M1/M2巨噬细胞比例升高，炎症因子含量升高；经Fer-1处理或过表达MPV17,部分恢复脾脏结构，CD3⁺ T细胞数量及脂质过氧化物减少，SLC7A11及PTGS2表达被抑制，M1/M2巨噬细胞比例及炎症因子的含量降低。高铁饮食导致GPX4表达降低，p-ERK表达升高，抑制ERK部分恢复GPX4表达，激活ERK降低GPX4表达；MPV17抑制ERK部分恢复GPX4表达，MPV17部分恢复因ERK激活导致的线粒体膜电势降低。结论 铁过载可诱导小鼠脾脏CD3⁺ T细胞发生铁死亡，MPV17通过阻断ERK信号抑制高铁饮食诱导的脾脏CD3⁺ T细胞铁死亡。
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  敲低双特异性磷酸酶5(DUSP5)通过阻断NF-κB信号抑制卡介苗诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应

  任超, 刘文淼, 骆佳

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 404-410. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009779

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  目的 探讨双特异性磷酸酶5(DUSP5)对卡介苗(BCG)介导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎性反应的调控作用。方法Western blot法检测BCG感染RAW264.7巨噬细胞0.5、 1、 2、 4、 6、 8、 12、 24 h,DUSP5表达变化；采用小干扰RNA(siRNA)技术下调RAW264.7巨噬细胞DUSP5水平，并设置siRNA阴性对照(si-NC)组、 DUSP5敲低(si-DUSP5)组、 si-NC联合BCG感染组、 si-DUSP5联合BCG感染组。实时定量PCR检测细胞白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、 IL-10的mRNA表达，ELISA检测细胞上清液IL-1β、 IL-6、 TNF-α、 IL-10含量；Western blot法检测细胞核因子κB(NF-κB)与磷酸化的NF-κB(p-NF-κB)表达变化。结果 BCG感染上调RAW264.7巨噬细胞核DUSP5蛋白表达，并在BCG刺激4 h后，DUSP5表达量达到高峰；与si-NC联合BCG感染组相比，敲低DUSP5抑制细胞促炎因子IL-1β、 IL-6与TNF-α表达与分泌，而抑炎因子IL-10表达不受DUSP5的影响；且敲低DUSP5抑制细胞NF-κB磷酸化。结论 敲低DUSP5通过阻断NF-κB信号抑制BCG介导的巨噬细胞炎性反应。
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  苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

  王慧, 闫晓培, 徐莉

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 411-418. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009790

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  目的 探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法 16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、 100、 200)μmol/L Alo共处理后，CCK-8法检测细胞活力，试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性；原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、 Western blot法检测细胞凋亡，ELISA检测炎性因子水平；2′, 7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平；Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后，采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果 CSE暴露可降低16HBE细胞活力，增加LDH释放和细胞凋亡，增强炎症反应和氧化应激水平，且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路；经Alo处理后，细胞活性升高，LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降，且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活；TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。
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  H3K27乙酰化修饰促进lncRNA OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导过敏性鼻炎鼻黏膜上皮细胞凋亡

  谢勇, 佘志强, 李容华, 吴荣华, 王瑢, 刘继远

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 419-427. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009757

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  目的 本研究旨在探讨组蛋白3的27位赖氨酸(H3K27)乙酰化修饰对长链非编码RNA OPA相互作用蛋白5-反义RNA1(lncRNA OIP5-AS1)转录的促进作用，探讨其通过调控Toll样受体4(TLR4)对过敏性鼻炎(AR)中鼻黏膜上皮细胞(NEC)凋亡的影响。方法 白细胞介素13(IL-13)处理NEC以建立AR细胞模型。采用实时定量PCR检测OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和体外细胞模型中的表达。ELISA检测粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、嗜酸性粒细胞趋化因子1(eotaxin-1)和黏蛋白5AC(MUC5AC)的浓度。原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法用于检测NEC的凋亡。双荧光素酶报告实验用于验证OIP5-AS1和TLR4的关系。染色质免疫沉淀(ChIP)实验分析用于验证OIP5-AS1启动子区组蛋白的H3K27乙酰化修饰。结果 与健康对照和未处理的NEC相比，OIP5-AS1和TLR4在AR患者鼻黏膜组织和IL-13刺激的NEC中均表达升高。敲减OIP5-AS1可降低IL-13诱导的NEC的TLR4水平，而过表达OIP5-AS1可增加IL-13处理的NEC的TLR4水平。敲减OIP5-AS1可降低IL-13处理的NEC凋亡率及GM-CSF、 eotaxin-1和MUC5AC的分泌，而过表达TLR4可部分逆转敲减OIP5-AS1对NEC凋亡及GM-CSF、 eotaxin-1和MUC5AC表达的影响。此外，H3K27ac在OIP5-AS1的启动子区域显著富集，H3K27乙酰化可促进OIP5-AS1在IL-13诱导的NEC中的表达。结论 H3K27乙酰化修饰促进OIP5-AS1转录并通过上调TLR4诱导AR中NEC凋亡。
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  有机磷农药胶体金免疫层析竞争法快速检测方法的建立

  李洋洋, 崔琳, 张宇彤, 郑佳慧, 艾金霞

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 428-434. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009777

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  目的 建立检测蔬果及饮用水等样本中的氧乐果、辛硫磷、敌百虫、对硫磷等有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法并研制检测试纸条。方法 N-羟基琥珀酰亚法合成有机磷人工抗原；制备乙酰胆碱酯酶抗原及纯化及其抗血清制备、纯化与标记；优化试纸条工作参数，并进行性能测试。结果 抗血清效价在1∶32～1∶64之间，蛋白含量约为2 mg/mL。纯化后的多克隆抗体在相对分子质量（M_r）25 000和55 000处出现目的条带，纯度较好；试纸条反应时间在5～10 min,样本检测限为200 ng/mL,特异性及准确性良好，试纸条有效期为6个月。结论 建立了简便快速检测多种有机磷成分的胶体金免疫层析检测方法，适合大量样本的现场初筛。
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  B7-H3在结直肠癌中的表达特征分析和临床意义

  邵宇阳, 石通国, 郭凌川, 陈卫昌

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 435-442. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009704

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  目的 探讨B7同源物3（B7-H3）在结直肠癌（CRC）组织中的表达特征及临床意义，探究其与肿瘤糖酵解过程以及与肿瘤微环境中免疫细胞浸润的相关性。方法 从肿瘤基因组图谱数据库（TCGA）下载CRC转录组数据和临床病理数据，分析B7-H3的表达情况和临床意义。基于TCGA数据分析CRC内糖酵解相关基因表达与B7-H3表达的相关性。使用通过估计RNA转录物相对子集的细胞类型鉴定（CIBERSORT）算法探究B7-H3表达与22种免疫细胞浸润的关系。收集51例CRC患者的手术标本及癌旁正常组织标本，应用免疫组织化学染色方法对数据库分析结果进行验证。结果 B7-H3在CRC组织中的表达上调，且与肿瘤浸润深度、 TNM分期晚期和不良预后密切相关。此外，B7-H3表达与CRC内糖酵解相关基因上调密切相关。免疫细胞浸润分析显示共有16种免疫细胞的浸润水平与B7-H3表达密切相关，进一步发现B7-H3表达与CD8⁺T细胞浸润在转录水平上呈负相关，但两者在蛋白水平上不相关。结论 B7-H3在CRC组织中高表达，与CRC疾病进展和患者的不良预后密切相关。此外，B7-H3与糖酵解相关基因以及免疫细胞浸润之间的相关性，提示B7-H3在调控肿瘤糖酵解和肿瘤免疫中起到关键作用。
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  妊娠次数及孕产妇血型增加血小板抗体阳性率

  李娜, 魏华, 杨世明, 任冬霞, 卫国强

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 443-446. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009776

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  目的 研究妊娠对血小板抗体阳性率及其特异性的影响。方法 随机选取215名无输血史的孕产妇，采用固相凝集法对其进行血小板抗体筛选，并对结果阳性者进行抗体特异性鉴定。结果 孕产妇血小板抗体产生率为8.84%,其中妊娠1次组(2.83%)与妊娠2次组(13.85%)及妊娠≥3次组(15.91%)相比，孕产妇血小板抗体产生率明显增加；与O型孕妇相比，A型孕妇血小板抗体阳性率明显升高。血小板抗体的产生与妊娠年龄无关。孕妇的血小板抗体中，人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ)类抗体占比83.3%,HLA-Ⅰ和人血小板抗原5b(HPA-5b)抗体占比5.6%,HPA-5b抗体占比11.1%。结论 妊娠次数及孕产妇血型与血小板抗体的产生密切相关，孕产妇血小板特异性抗体以抗HPA-5b为主。应对有多次孕产史或异常分娩史的孕产妇，尤其是A型孕产妇进行血小板抗体的监测。
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  小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

  薛潘, 董阳超, 武福星, 陈洋, 张剑, 元航, 武苏闪, 袁若栋, 李宝莉, 雷迎峰

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 447-454. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009751

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  目的 制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法 首先构建ZIKVEecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后，利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达，经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后，获得多克隆抗体血清，进行效价测定，并利用ZIKVprME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Westernblot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞，并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原，利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性，进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果 成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性；制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体，其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体，一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶10～8;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体，与其他黄病毒无交叉反应。结论 成功制备了小鼠抗ZIKVEecto单克隆抗体，为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。
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  血管活性肠肽调控滤泡辅助性T细胞/滤泡调节性T细胞平衡治疗溃疡性结肠炎的研究进展

  杨铭杰, 杨新棵, 李京涛, 魏海梁, 闫曙光

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 455-459. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009715

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  溃疡性结肠炎(UC)是以结肠黏膜屏障持续损伤为病理基础的自身免疫性疾病。滤泡辅助性T(Tfh)细胞和滤泡调节性T(Tfr)细胞的异常表达与UC的发生发展密切相关，Tfh细胞具有分泌促炎因子、辅助B细胞产生抗体等作用，能够促进UC的发展，Tfr细胞则具有抑制Tfh细胞活性、分泌抗炎因子等作用，如何调节两者平衡已成为UC的潜在治疗靶点之一。血管活性肠肽(VIP)对UC具有防治作用，其机制与调控Tfh/Tfr细胞平衡密切相关，可对UC的治疗提供思路。
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  树突状细胞来源外泌体在变应性鼻炎中的研究进展

  康成林, 刘朋, 刘悦, 曾宪海, 赵海亮, 邱书奇, 刘江琦

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 460-464. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009710

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  变应性鼻炎(AR)是耳鼻喉科常见疾病。尽管其不是一种危及生命的严重疾病，但它是许多并发症的基础，是哮喘控制不佳的主要风险因素。常年性AR对整个社会生产力和生活质量的负面影响并不亚于哮喘。在AR的发病机制中树突状细胞(DC)扮演着重要的角色。DC来源的外泌体(DEX)不仅具有DC的生物学特性，还可以促进T细胞的启动和活化以及2型辅助T(Th2)细胞的成熟和分化。DEX可以呈递过敏原并参与过敏性免疫反应，能通过多个环节来调节AR中的信号转导。DEX携带的抗过敏药能够减轻AR的过敏性气道炎症并有效治疗Th2细胞介导的AR,因此，DEX在AR的发病机制和治疗中具有重要作用。
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  免疫细胞在支气管哮喘发病机制中的作用研究进展

  屯妮萨古丽·艾买提江, 李改茹

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 465-471. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009682

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  支气管哮喘是由各种免疫细胞共同参与的慢性气道炎症性疾病。T淋巴细胞[包括1型辅助T(Th1)细胞、 Th2细胞、 Th17细胞、调节性T细胞(Treg)、滤泡辅助性T(Tfh)细胞和细胞毒性T(Tc)细胞]、固有淋巴样细胞(ILC)、 B细胞、粒细胞(肥大细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、中性粒细胞)、巨噬细胞及树突状细胞(DC)等作为参与哮喘免疫机制的主要角色，被变应原激活后，分泌各自特异性细胞因子，其在功能上相互作用、相互联系，形成复杂的哮喘相关免疫细胞相互作用网络体系。哮喘相关免疫细胞以固有免疫和获得性免疫，细胞免疫和体液免疫等免疫应答的方式，进行多靶点和多环节的动态调控免疫机制参与哮喘发病机制。Treg、调节性B细胞(Breg)、巨噬细胞及DC的免疫抑制作用有待进一步深入研究，有望成为治疗哮喘和研发新药的重要靶点。
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  肿瘤相关巨噬细胞在宫颈癌中的研究进展

  李丹, 卢艳

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(05): 472-478. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009697

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  肿瘤相关巨噬细胞(TAM)在肿瘤微环境(TME)中可以分化为M1型和M2型巨噬细胞表型，其中M2型巨噬细胞在恶性肿瘤中发挥重要作用。在宫颈癌中，TAM加重人乳头瘤病毒(HPV)感染，促进肿瘤细胞增殖、侵袭和迁移，促进脉管形成，诱导免疫耐受。靶向TAM的治疗已成为宫颈癌免疫治疗的热点。