2024年, 第40卷, 第01期　
刊出日期：2024-01-25

  

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  CD226在小鼠小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)中的表达

  羊璐, 马菁昌, 刘懿天, 王婷婷, 王玉玲, 庄然, 张正祥

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 1-6. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009689

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  目的 观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法 采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠炎模型，观察CD226在ILC3上表达的变化情况。结果 小鼠小肠ILC1和ILC3均表达CD226;肠炎模型中ILC3所占比例降低，但CD226在ILC3上的表达水平升高。结论 小鼠小肠表达CD226,DSS诱导的肠炎模型中虽然ILC3比例降低，但CD226在ILC3的表达增加。
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  支气管肺发育不良小鼠肺组织FOXP3⁺调节性T细胞（Treg）数量减少且向RORγt⁺FOXP3⁺Treg转换

  何朗粤, 卢红艳, 朱莹, 江健锋, 鞠慧敏, 乔瑜, 魏善杰

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 7-12. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009680

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  目的 探讨调节性T淋巴细胞（Treg）表型转换在支气管肺发育不良（BPD）小鼠肺组织中的作用。方法 C57BL/6新生小鼠随机分成空气组及高氧组，每组10只，高氧组建立新生小鼠高氧暴露的BPD动物模型。在小鼠生后7 d和14 d,每组各处死5只小鼠，取出新鲜肺组织。HE染色观察肺组织病理变化，Western blot法检测肺表面活性蛋白C（SP-C）表达水平；流式细胞术检测肺组织中叉头盒P3（FOXP3）⁺Treg及维甲酸相关孤核受体γt（RORγt）⁺FOXP3⁺ Treg占CD4⁺淋巴细胞百分比，ELISA检测肺组织中白细胞介素17A（IL-17A）、 IL-6的含量。采用Spearman相关分析法分析FOXP3⁺Treg与SP-C相对表达量的相关性以及RORγt⁺FOXP3⁺ Treg与IL-17A、 IL-6含量的相关性。结果 与同时间点空气组相比，高氧组肺泡结构简单化，放射状肺泡计数与SP-C相对表达水平均明显下降，高氧组FOXP3⁺Treg占比减少，RORγt⁺FOXP3⁺ Treg占比增多，肺组织IL-17A、 IL-6含量明显升高。FOXP3⁺Treg与SP-C相对表达水平呈正相关，RORγt⁺FOXP3⁺ Treg与IL-17A、 IL-6含量呈正相关。结论 BPD小鼠肺组织FOXP3⁺Treg数量减少并向RORγt⁺ FOXP3⁺ Treg转换，可能参与高氧所致肺损伤。
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  IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路增强小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬功能

  华梦晴, 高培宇, 方芳, 苏浩宇, 宋传旺

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 13-18. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009693

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  目的 探讨白细胞介素6(IL-6)对MH-S小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能的影响及其相关机制。方法 脂多糖(LPS)经气道滴入激发构建小鼠急性肺损伤(ALI)模型，ELISA检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-6的含量。体外培养MH-S细胞，在信号转导子与转录激活子3 (STAT3)抑制剂Stattic(5μmol/L)存在与否的情况下，再加入IL-6(10 ng/mL～500 ng/mL)刺激6 h,加入荧光微球孵育2 h后，采用流式细胞术检测MH-S细胞吞噬荧光微球情况；Western blot法检测磷酸化的Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)、肌动蛋白相关蛋白2(Arp2)、纤维型肌动蛋白(F-actin)的表达水平。结果 鼻腔滴入LPS后，小鼠BALF中IL-6含量显著升高。随着IL-6刺激剂量的增加，MH-S细胞吞噬荧光微球的作用增强，Arp2、 F-actin蛋白的表达水平升高。100 ng/mL IL-6刺激MH-S细胞后，p-JAK2和p-STAT3蛋白的表达水平升高。阻断MH-S细胞STAT3信号后，IL-6促进细胞吞噬的效应完全消失，IL-6诱导的Arp2、 F-actin蛋白表达增加被抑制。结论 IL-6通过激活JAK2/STAT3信号通路促进MH-S细胞Arp2、 F-actin蛋白的表达增强吞噬功能。
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  SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

  赵仁双, 朱羿龙, 尚超, 韩继成, 刘子睿, 修志儒, 李善智, 李雅茹, 杨霞, 李霄, 金宁一, 金鑫, 李一权

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 19-25. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009716

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  目的 构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法 参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因，并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上，构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内，经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后，检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响；通过肌肉免疫小鼠后，分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平；通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果 利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选，成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论 成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。
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  MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻特应性皮炎小鼠炎症

  田利民, 呼延晓晖, 杨森, 王梦婕, 杨越楠

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 26-32. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009702

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  目的 探讨特应性皮炎（AD）模型中白细胞介素17C（IL-17C）介导滤泡辅助性T（Tfh）细胞分化的意义。方法BALB/c小鼠分为对照组、AD模型组、低剂量MOR106处理组、高剂量MOR106处理组，每组8只。除对照组外，其余各组均用2,4-二硝基氯苯（DNCB）处理建立AD模型，低剂量和高剂量MOR106处理组分别给与5 mg/kg或10 mg/kg MOR106（抗IL-17C huIgG1）处理。通过流式细胞术分析小鼠外周血中Tfh细胞亚群的分化，并采用Western blot法检测皮肤组织中Janus激酶2/信号转导子与转录激活子3（JAK2/STAT3）信号通路蛋白表达。结果 与对照组相比，AD模型组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著增加，AD组小鼠的Tfh细胞亚群显示去调节分化，导致外周血中CD4⁺ CXC趋化因子受体5（CXCR5）⁺ γ干扰素（IFN-γ）⁺ Tfh1细胞、 CD4⁺CXCR5⁺IL-17A⁺Tfh17细胞和CD4⁺CXCR5⁺IL-21⁺Tfh21细胞的百分比显著增加，以及CD4⁺CXCR5⁺IL-10⁺Tfh10细胞和CD4⁺CXCR5⁺叉头盒转录因子3（FOXP3）⁺滤泡调节性T（Tfr）细胞的百分比显著减少，磷酸化的JAK2（p-JAK2）、 p-STAT3蛋白水平显著增加；与AD模型组相比，MOR106处理组皮炎严重程度评分、两耳之间的质量差异、脾脏质量、脾脏指数均显著降低。MOR106处理有效地逆转AD小鼠外周血中Tfh1细胞、 Tfh10细胞、 Tfh17细胞、 Tfh21细胞和Tfr细胞的这些变化趋势。与AD组相比，低剂量和高剂量MOR106处理组小鼠p-JAK2、 p-STAT3蛋白水平显著降低。结论 MOR106通过阻断JAK2/STAT3信号通路、抑制IL-17C介导的Tfh细胞分化来减轻AD小鼠炎症反应。
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  敲低IFI30通过激活STAT1抑制U251人胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡

  叶静静, 徐文琴, 陈天兵

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 33-42. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009816

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  目的 构建γ干扰素诱导蛋白30（IFI30）表达抑制的U251细胞，探讨IFI30表达受到抑制后对细胞生物学功能的影响及机制。方法 在线设计敲低靶点并合成3条小干扰RNA（siRNA）,转染后通过实时定量PCR技术检测抑制效率，选取抑制效率最高的siRNA序列构建短发夹RNA （shRNA）质粒。重组质粒与包装质粒共转染HEK293T细胞制备慢病毒。用慢病毒感染胶质瘤U251细胞，经嘌呤霉素筛选得到阳性细胞。采用CCK-8实验、5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EdU）实验和集落形成实验分析细胞增殖活性，流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡，Transwell^TM实验检测细胞侵袭、划痕实验检测细胞迁移。Western blot法检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、B细胞淋巴瘤因子2（Bcl2）、上皮钙黏蛋白（E-cadherin）和神经钙黏蛋白（N-cadherin）、信号转导子与转录激活子1（STAT1）。结果 筛选到有效的靶点序列并成功建立IFI30表达抑制的U251细胞。敲低IFI30的表达抑制U251细胞增殖，G0/G1期细胞比例增加，S期减少，细胞凋亡明显增加，细胞的侵袭和迁移能力降低。同时，U251细胞cyclin D1、Bcl2和N-cadherin的表达降低，E-cadherin, STAT1磷酸化表达增加。结论 敲低IFI30通过促进STAT1活化抑制U251细胞增殖、侵袭和迁移并促进其凋亡。
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  DNase1L3分泌减少和相关抗体诱发散发性SLE患者NET降解障碍

  黄建军, 毛桐俊, 张军, 李志, 武其文

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 43-50. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009701

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  目的 探讨DNA酶1(DNase1)和DNA酶1样分子3(DNase1L3)活性改变与散发性系统性红斑狼疮(SLE)患者人群中中性粒细胞胞外诱捕网(NET)降解受损相关性及发生机制。方法 募集46例散发性SLE患者和30名正常个体，采用ELISA检测DNase1、 DNase1L3及相应自身抗体，免疫沉淀法分离样本DNase1和DNase1L3,改进的免疫荧光法检测NET和酶降解活性，酶联免疫斑点实验(ELISPOT)、 Western blot法和反转录PCR分析外周血单个核细胞(PBMC)分泌DNase1L3能力。结果H3-dsDNA和Ela-dsDNA两种复合物在SLE人群中的水平显著升高；低密度中性粒细胞(LDG)在SLE人群中的水平显著高于正常人群，LDG与H3-dsDNA和Ela-dsDNA两种NET复合物具有显著正相关性。SLE患者血浆体外降解NET的能力显著低于正常人群；DNase1和DNase1L3不同比例的综合降解实验显示DNase1L3降低是影响NET残留升高的关键；SLE患者人群DNase1L3自身抗体也显著高于正常人群；SLE患者PBMC分泌DNase1L3的能力相对正常人群减退。结论 DNase1L3分泌减少和相关自身抗体的存在是SLE人群NET降解能力减退的主要因素，为SLE患者病情监测和治疗提供新的方向。
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  miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻急性痛风性关节炎的炎症反应

  侯楠, 马祥会, 周玮, 袁敏, 徐黎明, 孙焕霞, 刘一帆, 刘立宁, 石颜军, 李春先, 付衍法

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 51-57. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009817

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  目的 探索白细胞介素1β(IL-1β)在急性痛风性关节炎(AGA)的关节损伤过程中与miR-185-5p的关系。方法 采用实时荧光定量PCR检测89名AGA患者及91名健康志愿者的血清miR-185-5p的水平，采用Pearson相关系数法评估miR-185-5p的表达水平与视觉模拟(VAS)评分以及IL-1β水平之间的相关性；采用受试者工作特征(ROC)曲线评估miR-185-5p对AGA的诊断价值。采用尿酸钠(MSU)诱导THP-1细胞建立体外急性痛风性炎症细胞模型，通过体外转染miR-185-5p模拟物或抑制物增加或降低THP-1细胞miR-185-5p的表达水平后，采用ELISA检测THP-1细胞白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-8及肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平；荧光素酶报告基因实验确定miR-185-5p与IL-1β的3′-非翻译区(3′-UTR)的相互作用。结果 与健康对照组相比，AGA患者血清miR-185-5p的水平显著降低；血清miR-185-5p的水平与VAS评分和IL-1β的表达水平均呈负相关；ROC曲线下面积为0.905,敏感性为80.17%,特异性为83.52%。下调miR-185-5p显著促进THP-1细胞IL-1β、 IL-8及TNF-α的表达，而过表达miR-185-5p则呈现相反的结果；荧光素酶报告基因实验显示IL-1β是miR-185-5p的靶基因，并且负调控IL-1β的表达。结论 miR-185-5p通过靶向抑制IL-1β减轻AGA的炎症反应。
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  抗G与抗D/抗C的特异性识别策略及其在RhD阴性孕妇同种免疫妊娠中的应用

  李娜, 杨世明, 穆士杰, 赵静雅

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 58-61. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009692

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  目的 建立完善的抗D、抗C和抗G的血清学检测方法及鉴别策略，对已产生抗G并且存在产生抗D风险的孕妇注射Rh免疫球蛋白的可行性和必要性给与证据支持，以预防新生儿溶血病。方法 对不规则抗体鉴定初检为抗D和C阳性的RhD阴性孕妇，根据抗G可与D、 C抗原反应及与C抗原的结合性强于D抗原的特性，从献血员中随机选择ABO同型dCcee悬浮红细胞作为第一次吸收细胞，与待检血清进行吸收放散试验，分别检测其吸收后血清及放散液，以确定待检血清中是否存在抗D、抗G;再随机选择ABO同型DccEE悬浮红细胞作为第二次吸收细胞，与待检血清进行反应，吸收完全后上清液与C⁺D^-红细胞反应以确定待检血清中是否存在抗C。结果 使用两次吸收放散方法，鉴定8例待检标本，结果显示1例标本存在抗D、抗C及抗G;2例标本存在抗D及抗G;2例标本存在抗C及抗G;3例标本经吸收放散试验鉴定为存在抗D及抗C。结论 通过两次吸收放散试验，即可有效区分抗D、抗C及抗G,这有利于更好的管理RhD阴性孕妇妊娠期间的同种免疫反应，并有助于产前有针对性地注射Rh免疫球蛋白，有效预防Rh阴性胎儿新生儿溶血病。
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  小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

  武福星, 董阳超, 张剑, 薛潘, 袁若栋, 陈洋, 元航, 李宝莉, 雷迎峰

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 62-68. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009695

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  目的 制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法 构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后，IPTG诱导表达，主要为包涵体形式。包涵体纯化后，通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白；以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂，将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠，间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×10～4的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白，3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞，接种小鼠腹腔后制备腹水；利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平；将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞，通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性；利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果 成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白；制备了3G6G10、 3D7G2、 3B9E8、 3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、 IgM(κ)、 IgM(κ)、 IgG1(κ); 3G6G10、 3B9E8、 3D7G2腹水抗体效价均为10～5, 3D5B7达到10～7;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论 成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。
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  哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路与调节性T细胞营养代谢调控机制研究进展

  吴茗, 王芳

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 69-73. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009688

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  肿瘤微环境中发生的代谢重编程会影响T细胞的代谢特征，诱导免疫抑制促进肿瘤免疫逃逸。哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在调控各种免疫细胞的不同功能方面发挥着重要作用。本文主要回顾了mTOR信号调节细胞能量代谢进程的分子机制，以及不同营养环境下mTOR信号的活化状态。此外，还总结了目前研究中mTOR信号在调节性T细胞(Treg)代谢和功能过程中的作用，评估了mTOR作为临床免疫治疗靶点的潜力和目前应用的挑战性。
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  靶向抑制有氧酵解联合免疫治疗在肾细胞癌中的研究进展

  张坤, 茹梦瑶, 王佳媛, 赵菊梅, 沈岚

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 74-79. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009675

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  肿瘤有氧酵解是肿瘤代谢重编程的主要特征之一，这种异常的糖酵解代谢途径为肿瘤生长和增殖提供生物能量和生物原材料。肿瘤细胞不仅通过有氧酵解途径为自身提供生物原材料和能量，还通过免疫微环境逃脱免疫监视，发生免疫逃逸，从而抵抗肿瘤免疫治疗，促进肿瘤的发生和发展。本文以肾细胞癌的发病机制为背景，阐述其有氧酵解代谢的特征、糖酵解代谢对肿瘤免疫微环境的影响、糖酵解代谢抑制剂对肾细胞癌免疫微环境的影响、糖酵解代谢抑制剂联合免疫检查点抑制剂治疗肾细胞癌的前景与展望。
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  基于自然杀伤(NK)细胞的肝癌免疫疗法研究进展

  朱鑫月, 周玉付, 朱诗国

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 80-88. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.009698

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  肝细胞肝癌(HCC)异质性高，晚期诊断和化疗耐药使其成为我国难治性肿瘤之一。自然杀伤(NK)细胞在机体的免疫监视过程中充当重要角色。但在肝癌的进展过程中，NK细胞的功能受损致肿瘤免疫逃逸。该文总结了HCC中基于NK细胞的不同免疫治疗策略，包括直接输注过继性NK细胞免疫疗法、基因工程NK细胞免疫疗法、靶向NK细胞受体免疫疗法、改变免疫抑制微环境免疫疗法、细胞因子增强NK细胞肿瘤毒性免疫疗法以及中医药增强NK细胞肿瘤毒性免疫疗法，这些基于NK细胞的免疫治疗策略已显示出巨大的治疗潜力。
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  结核分枝杆菌分泌蛋白早期分泌性抗原6(ESAT-6)的免疫学性质及其在新型疫苗中作用的研究进展

  李玉洁, 余海燕, 杨雨婷, 杨国平

  细胞与分子免疫学杂志. 2024, 40(01): 89-94. https://doi.org/10.13423/j.cnki.cjcmi.temp.009672

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  早期分泌性抗原6(ESAT-6)是结核分枝杆菌(MTB)关键的毒力因子，可通过抑制巨噬细胞的吞噬杀菌功能与自噬反应抵抗机体对MTB的清除，从而减弱机体对MTB感染的免疫防御功能。此外，ESAT-6诱导的巨噬细胞的凋亡与固有免疫细胞的大量坏死可促进MTB的扩散、定植，引发MTB的全身感染。ESAT-6还可抑制Th1细胞的保护性免疫反应从而抑制相关促炎细胞因子的分泌，引发机体免疫功能的紊乱，加速MTB感染进程。在这一感染过程中，ESAT-6所具备的高度免疫原性使其可作为优势抗原用于新型结核病(TB)疫苗的研制，具有广阔的发展前景。