目的 结核分枝杆菌（Mtb）耐药菌株的流行加剧了结核病（TB）的全球负担，凸显了对新的TB治疗策略的需求。方法 表达环二腺苷酸（c-di-AMP）分解酶磷酸二酯酶B（CnpB）的重组腺病毒疫苗（rAd-CnpB）经黏膜免疫正常小鼠，单独或联合药物免疫治疗Mtb呼吸道感染小鼠。ELISA检测小鼠血清及肺泡灌洗液（BALF）抗体水平，实时定量PCR检测小鼠肺组织中细胞因子γ干扰素（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）转录水平，流式细胞术检测肺、脾CD4⁺、CD8⁺T细胞亚群细胞比例，ELISA检测脾细胞抗原刺激后的细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子α（TNF-α）分泌水平，平板计数法计数Mtb感染小鼠肺、脾的荷菌数。结果 rAd-CnpB滴鼻免疫可诱导小鼠血清高滴度的IgG,以及BALF中IgG和IgA产生，肺、脾T淋巴细胞亚群改变。rAd-CnpB单独或联合药物治疗Mtb感染小鼠可诱导血清IgG水平、BALF中IgA和IgG水平显著增高，rAd-CnpB免疫促进Mtb感染小鼠的脾细胞CnpB抗原特异性的细胞因子和炎症因子分泌。rAd-CnpB单独或联合药物免疫治疗并不显著影响Mtb呼吸道感染小鼠肺、脾荷菌数。结论 rAd-CnpB经黏膜免疫可诱导小鼠显著的黏膜、体液免疫反应，并显著增强Mtb感染小鼠中CnpB特异性细胞免疫应答。