核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定

黄萃园, 王娇娇, 李文强, 刘丽, 王伟, 曾萍, 张静

实用临床医药杂志 ›› 2024, Vol. 28 ›› Issue (08) : 22-28.

核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定

  • 黄萃园, 王娇娇, 李文强, 刘丽, 王伟, 曾萍, 张静
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摘要

目的 构建及鉴定携带小鼠核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6(NLRP6)基因(NM_133 946.2)的过表达重组腺病毒载体。方法 合成小鼠NLRP6基因的编码序列,经酶切后插入腺病毒载体(GL2003),转化大肠杆菌感受态细胞DH-5α进行培养,挑取转化子,进行聚合酶链反应(PCR)鉴定后送测序进行比对。采用蛋白质印迹法(Western blot)验证重组质粒中NLRP6蛋白的表达。利用Admax包装系统获得重组腺病毒载体Ad-NLRP6,导入HEK293细胞,经扩增纯化后测定病毒滴度。结果 双酶切及DNA测序证明NLRP6成功构建入表达质粒中,同时检测其携带的FLAG标签蛋白,表明NLRP6表达水平显著升高。包装并生产携带NLRP6的重组腺病毒,进一步将病毒感染HEK293细胞,Ad-NLRP6细胞表达绿色荧光蛋白提示感染成功,收集病毒,经扩增纯化后测定病毒滴度为4×1010 PFU/mL。结论 成功构建携带小鼠NLRP6基因的过表达重组腺病毒载体,这一结果为进一步研究NLRP6分子学功能提供了有效工具。

关键词

NLRP6基因 / 重组腺病毒载体 / 炎症 / 代谢性疾病

中图分类号

R346 / Q789

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黄萃园, 王娇娇, 李文强, 刘丽, 王伟, 曾萍, 张静. 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白6重组腺病毒过表达载体的构建与鉴定. 实用临床医药杂志. 2024, 28(08): 22-28

基金

湖北省教育厅中青年人才项目(Q20221211)

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