2024年, 第55卷, 第06期　
刊出日期：2024-06-15

  

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  CaMKK2调控肝细胞癌化疗耐药性的作用和机制

  惠博, 张健, 李韧, 李江伟, 杨正安

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 671-679. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.001

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  目的 探讨钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶2(calcium/calmodulin-dependent protein kinase kinase 2,CaMKK2)调控肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)化疗耐药性的作用及其机制。方法 (1)为了检测CaMKK2在HCC耐药细胞株中的表达变化，将实验分为亲本组和耐药组。采用浓度梯度递增法建立奥沙利铂(oxaliplatin, OXA)耐药细胞株MHCC97H/OXA和Hep3B/OXA。采用Western blot检测CaMKK2的磷酸化和总蛋白表达水平。(2)为了检测CaMKK2对肝细胞癌化疗药性的调控作用，将实验分为对照组和CaMKK2敲除组。采用CRISPR/Cas9技术敲除MHCC97H/OXA和Hep3B/OXA细胞株中的CaMKK2基因表达，采用Western blot验证CaMKK2敲除效率。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)实验检测CaMKK2敲除对MHCC97H/OXA和Hep3B/OXA细胞株细胞存活率的影响。采用流式细胞术检测CaMKK2敲除对MHCC97H/OXA和Hep3B/OXA细胞株凋亡的影响。采用Western blot检测CaMKK2敲除对微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)、p62、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine 5′-monophosphate-activated protein kinase, AMPK)和UNC-51样激酶1(UNC51-like kinase 1,ULK1)蛋白表达水平的影响。(3)为了验证CaMKK2对肝细胞癌化疗药性的调控作用，将实验分为CaMKK2敲除+空载体组和CaMKK2敲除+CaMKK2载体组。采用Western blot检测CaMKK2的蛋白表达水平。采用CCK-8实验检测重新表达CaMKK2对CaMKK2敲除的细胞耐药性的影响。采用Western blot检测重新表达CaMKK2对CaMKK2敲除的细胞中AMPK、ULK1和LC3蛋白表达水平的影响。结果 (1)与亲本组相比，耐药组HCC细胞株中CaMKK2的总蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),而CaMKK2的磷酸化水平显著升高(P<0.01)。(2)与对照组比较，CaMKK2敲除组细胞中CaMKK2表达水平显著减少(P<0.01)。与对照组比较，CaMKK2敲除组HCC耐药细胞对OXA的敏感性显著提高(P<0.05),OXA细胞凋亡率显著升高(P<0.01)。与对照组比较，CaMKK2敲除组LC3Ⅱ/LC3Ⅰ显著降低，p62蛋白水平显著升高，p-AMPK/AMPK以及p-ULK1/ULK1显著降低(均P<0.01)。(3)与CaMKK2敲除+空载体组比较，CaMKK2敲除+CaMKK2载体组HCC耐药细胞对OXA的敏感性显著降低(P<0.01),LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、p-AMPK/AMPK和p-ULK1/ULK1显著升高(P<0.01)。结论 基因敲除CaMKK2有效逆转HCC化疗耐药性，其作用机制与调控AMPK/ULK1介导的自噬通路相关。
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  EZH2对结直肠肿瘤行为学的影响及其机制

  武雪亮, 韩磊, 樊建春, 路永刚

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 680-688. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.002

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  目的 探究EZH2对结直肠肿瘤行为学的影响及其作用机制。方法 （1）将40只BALB/c-nu裸鼠随机分为4组：EZH2-NC组、EZH2-OE组、EZH2-NC+PD1抑制剂组、EZH2-OE+PD1抑制剂组。按照Lipofectamine^TM2000转染法将SW480细胞稳定转染EZH2空载体质粒或EZH2过表达载体，取转染成功SW480细胞溶液分别注入小鼠右侧腋窝皮下构建皮下移植瘤模型，然后EZH2-NC+PD1抑制剂组和EZH2-OE+PD1抑制剂组小鼠尾静脉注射PD1抑制剂（150μg/mL）,21 d后观察肿瘤体积。（2）SW480稳转细胞分为4组：EZH2-NC组、EZH2-OE组、EZH2-NC+PD1抑制剂组（转染成功后加入1.5 ng/mL PD1抑制剂）、EZH2-OE+PD1抑制剂组（转染成功后加入1.5 ng/mL PD1抑制剂）。将以上4组SW480细胞和THP-1细胞进行共培养，应用CCK-8实验、划痕实验、Transwell实验分别检测SW480细胞增殖、迁移和侵袭能力。应用Western blot实验检测THP-1细胞中XBP-1、Cat K、Cat L、IL-6和Arg-1的蛋白表达水平和SW480细胞中的EZH2、p-STAT3、PD-1蛋白的表达水平。结果 （1）裸鼠成瘤结果显示，与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组肿瘤体积增大（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组肿瘤体积差异无统计学意义。（2）将SW480细胞和THP1细胞进行共培养后，与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力增强（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1抑制剂组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组SW480细胞增殖、迁移、侵袭能力差异无统计学意义。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组THP-1细胞中IL-6和Arg-1蛋白水平升高（P<0.05）;与EZH2-NC组相比，EZH2-NC+PD1抑制剂组IL-6和Arg-1蛋白水平下降（P<0.01）;与EZH2-OE组相比较，EZH2-OE+PD1抑制剂组IL-6和Arg-1蛋白水平下降（P<0.01）。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组THP-1细胞中XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平升高（P<0.01）;与EZH2-NC组比，EZH2-NC+PD-1抑制剂组XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平下降（P<0.01）;与EZH2-OE组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组XBP-1、Cat K和Cat L蛋白水平下降（P<0.01）。与EZH2-NC组相比，EZH2-OE组SW480细胞中EZH2、p-STAT3和PD-1蛋白水平升高（P<0.01）;与EZH2-NC+PD-1抑制剂组相比，EZH2-OE+PD-1抑制剂组EZH2和p-STAT3蛋白水平升高（P<0.05）。结论 EZH2通过上调STAT3/PD-1通路进而影响肿瘤相关巨噬细胞产生对结直肠癌进展发挥促进作用。
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  甘草查尔酮A对HL-60细胞恶性生物学行为的抑制作用及其机制

  韩萍萍, 王怀宇, 蔡云, 孙烨, 夏欣欣, 胡珊, 周冬枝, 韦素华

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 689-697. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.003

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  目的 探究甘草查尔酮A(LA)对急性髓系白血病(AML)细胞HL-60的作用及其机制。方法 将人AML细胞系HL-60细胞分为对照组、LA组(30μmol/L)、IL-6组(100 ng/mL,JAK2/STAT3信号通路激活剂)和LA+IL-6组。培养48 h后，采用MTT法和克隆形成实验检测HL-60细胞增殖活性；采用流式细胞术检测HL-60细胞周期分布和细胞凋亡；采用Transwell实验检测HL-60细胞侵袭和迁移；采用Western blot检测p21、p27、cyclin E2、CDK2、Bcl-2、Bax、cleaved-Caspase-3、p-JAK2,JAK2,p-STAT3和STAT3蛋白表达水平。结果 与对照组比较，LA组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P<0.05);G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均升高(P<0.05)。与对照组比较，IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均升高(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均升高(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均升高(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均降低(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达量均降低(P<0.05)。与IL-6组比较，LA+IL-6组细胞活力、克隆形成数、侵袭和迁移细胞数均降低(P<0.05),Bcl-2、cyclin E2和CDK2蛋白表达量均降低(P<0.05),JAK2和STAT3蛋白的磷酸化水平均降低(P<0.05),G0/G1期细胞比例和细胞凋亡率均升高(P<0.05),p21、p27、Bax和cleaved-Caspase-3蛋白表达量均升高(P<0.05)。LA+IL-6组和LA组间上述指标差异没有统计学意义。结论 甘草查尔酮A可抑制AML细胞系HL-60细胞增殖、侵袭和迁移，诱导细胞凋亡并将细胞阻滞在G0/G1期，其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。
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  TRIM59对人下咽癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的影响

  邵渝欢, 马赛菲, 王文忠

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 698-706. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.004

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  目的 探讨三结构域蛋白59(tripartite motif containing 59,TRIM59)对下咽癌细胞Fadu的生物学行为的影响及其机制。方法 通过肿瘤免疫估计资源数据库2.0(TIMER2)了解TRIM59在不同类型癌症中的表达情况，初步评估其在头颈部肿瘤中的表达差异。培养下咽癌细胞株Fadu,随机分为：实验组(si-TRIM59-1组，si-TRIM59-2组，si-TRIM59-3组)和对照组(NC组)。通过实时定量PCR法检测转染效率，选取转染成功且基因下调效率最高的两组进行后续实验。CCK-8实验、集落形成实验检测Fadu细胞增殖能力；Transwell实验、细胞划痕实验检测Fadu细胞迁移及侵袭能力；Western blot实验检测下调TRIM59后，TRIM59、JAK2/pJAK2、STAT3/pSTAT3、Bcl-2、Bax的表达；流式细胞术检测Fadu细胞凋亡率。结果 与NC组比较，实验组TRIM59 mRNA相对表达量下降(P<0.001),其中，si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组下降更为明显(P<0.05),因此，选取si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组进行后续实验。与NC组比较，si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组细胞增殖、迁移及侵袭能力均下降(P<0.05)。与NC组比较，si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组TRIM59、JAK2/p-JAK2、STAT3/p-STAT3表达量降低(P<0.05),凋亡相关蛋白中抑制蛋白Bcl-2表达量下降，而诱导蛋白Bax表达量则上升(P<0.05)。与NC组比较，si-TRIM59-1组和si-TRIM59-3组细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论 下调TRIM59后，人下咽癌细胞株Fadu的增殖、迁移及侵袭能力下降，细胞凋亡率上升，其机制可能与JAK2/STAT3通路有关。
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  人C/EBP β结构与功能的生物信息学分析及原核表达

  陈利荣, 刘玉玲, 贾艳梅, 李佳佳, 刘菲

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 707-712. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.005

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  目的 研究人CCAAT/增强子结合蛋白β(CCAAT/enhancer binding proteins, C/EBP β)原核表达载体的构建和蛋白表达，并通过生物信息学分析其结构和生物学功能。方法 收集对数生长期的肝癌细胞SMMC-7721,通过TRIzol法提取SMMC-7721细胞内总RNA,并以RNA为模板采用RT-PCR获得C/EBP β基因的编码序列，通过同源重组的方法将目的基因与原核表达质粒pET-28a(+)相连接，经过大肠杆菌转化、抗性筛选、质粒提取、酶切和DNA测序获得重组质粒pET-28a(+)-C/EBP β。将重组质粒导入大肠杆菌BL21中，通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl β-D-1-thiogal, IPTG)诱导C/EBP β重组蛋白表达，采用镍离子亲和层析法纯化C/EBP β融合蛋白，通过蛋白免疫印迹验证目的蛋白并分析C/EBP β的蛋白纯度。同时对人C/EBP β编码的蛋白质进行理化性质、亲水/疏水性、二级结构以及磷酸化位点等生物信息学分析。结果 通过RT-PCR成功获得人C/EBP β基因，构建的pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒经测序鉴定C/EBP β DNA序列完全正确，表明重组pET-28a(+)-C/EBP β质粒构建成功。C/EBP β蛋白是一个性质不稳定的亲水蛋白质，由345个氨基酸组成，分子量为36.105 kD,等电点为8.55。其是一种胞内蛋白质，主要分布在细胞质和细胞核。对其结构分析发现：无规则卷曲是其主要的二级结构，为60.87%。蛋白免疫印迹结果显示通过亲和层析纯化后获得较高纯度的C/EBP β。结论 本实验成功克隆并构建人pET-28a(+)-C/EBP β重组质粒，获得较高纯度的C/EBP β,为进一步C/EBP β蛋白功能的研究和抗体的制备奠定了良好的基础。
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  依达拉奉右莰醇对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的抑制作用及其机制

  段佳琪, 刘俊瑾, 邵云云, 常壮鹏, 王鑫, 侯锐钢

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 713-721. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.006

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  目的 探讨依达拉奉右莰醇减轻缺血性脑卒中(IS)神经炎症反应的作用机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、依达拉奉右莰醇(EDB)组、依达拉奉组，每组各9只。模型组及给药组用中动脉栓塞法(MCAO)建立IS大鼠模型，假手术组除不予线栓处理外与模型组操作一致。栓塞2 h后拔栓，同时EDB组和依达拉奉组分别尾静脉注射2.5 mg/kg的EDB和依达拉奉，假手术组和模型组大鼠注射等量生理盐水。采用神经功能评分评估神经功能损伤程度；2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色观察脑梗死面积；酶联免疫吸附试验(ELISA)法检查脑组织炎症因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)含量；RT-PCR检测大鼠脑组织趋化因子(CCL2、CCL5、CCR5、CCL7、CXCL1、CXCL2和CXCL12)、TLR4和NF-κB的mRNA表达量。BV2细胞随机分为对照组、脂多糖(LPS)组(10μg/mL)、依达拉奉右莰醇低、中、高浓度组(5,10,50μg/mL)、依达拉奉组(10μg/mL)。模型及给药组用10μg/mL LPS诱导24 h构建BV2细胞炎症模型，给药组于LPS诱导24 h后分别给于不同浓度的依达拉奉右莰醇和依达拉奉干预24 h。一氧化氮(NO)试剂盒检测各组NO产生量；RT-PCR和Western blot检测CCL2、TLR4和NF-κB的mRNA及蛋白表达量。结果 与模型组比较，EDB组大鼠神经功能缺损明显改善(P<0.01)、脑梗死区域显著降低(P<0.01)、脑组织中炎症因子(IL-6、TNF-α和IL-1β)含量显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组神经功能学评分、脑梗死体积及炎症因子降低(P<0.05)。与假手术组比较，模型组趋化因子CCL2、CXCL12、CCL7、CXCL2、CCL5和CXCL1的mRNA表达量均显著升高(P<0.01),其中以CCL2的mRNA表达量增高最为显著(P<0.01);与模型组比较，EDB组CCL2、CXCL12、CXCL1、CXCL2、CCL5的mRNA表达量均显著降低(P<0.01);与依达拉奉组相比，EDB组CCL2的mRNA表达量降低更显著(P<0.05)。与模型组比较，EDB组大鼠脑组织中CCL2、TLR4、NF-κB的mRNA表达量显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组大鼠脑组织中CCL2、NF-κB的mRNA表达量降低(P<0.05)。与LPS组比较，EDB组BV2细胞中NO含量明显下降，以高剂量组最显著(P<0.01),CCL2、TLR4、NF-κB的mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.01);与依达拉奉组比较，EDB组CCL2和TLR4的mRNA表达量降低(P<0.05),TLR4和NF-κB蛋白的表达量降低(P<0.05)。结论 EDB可能通过抑制CCL2-NF-κB信号通路抑制缺血性脑卒中大鼠神经炎症。
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  滋肾活血方对血管性痴呆大鼠认知功能障碍的治疗作用

  姚婷, 刘璐, 王馨苑, 邓谦, 石红梅, 蒋军林, 伍大华

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 722-730. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.007

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  目的 探究滋肾活血方改善血管性痴呆(vascular dementia, VD)大鼠认知功能障碍的分子机制。方法 采用双侧颈总动脉闭塞法(bilateral common carotid artery occlusion, BCCAO)构建VD大鼠模型，随机分为假手术组(sham组)、模型组(VD组)、滋肾活血方高剂量组(15.2 g/kg)、滋肾活血方中剂量组(7.6 g/kg)、滋肾活血方低剂量组(3.8 g/kg)、奥拉西坦组(阳性对照)。通过Morris水迷宫实验记录大鼠的逃避潜伏时间以及穿越平台的次数评估大鼠认知功能；HE染色观察海马组织病理学改变和炎性浸润；尼氏染色评估海马神经元损伤；免疫荧光检测海马组织小胶质细胞M1/M2极化情况；ELISA试剂盒检测海马组织促炎因子(TNF-α、IL-1β)和抗炎因子(TGF-β、IL-4)的水平；Western blot法检测TLR4、p65核蛋白水平。结果 与sham组相比，VD组大鼠逃避潜伏期延长(P<0.001),穿越平台次数减少(P<0.001),海马神经元排列不规则，炎性细胞浸润增多，Iba-1、CD16/32以及CD206的水平，促炎因子(TNF-α、IL-1β),抗炎因子(TGF-β、IL-4)水平以及TLR4和p65核蛋白水平均显著升高(P<0.001)。与VD组相比，滋肾活血方高、中、低剂量组和奥拉西坦组大鼠的逃避潜伏期缩短(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.01),大鼠神经元病理变化得到改善，Iba-1、CD16/32以及CD206的水平，促炎因子(TNF-α、IL-1β)以及TLR4和p65核蛋白水平的表达均明显降低(P<0.01),抗炎因子(TGF-β、IL-4)水平上调(P<0.01)。结论 滋肾活血方通过抑制TLR4/NF-κB信号通路促进小胶质细胞M2型极化缓解VD大鼠认知功能障碍。
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  阴道乳杆菌抑制加德纳菌的机制研究

  张瑞, 张晓宇, 马爱昕, 刘朝晖

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 731-734. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.008

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  目的 研究中国健康女性阴道微环境中分离的乳杆菌对细菌性阴道病患者阴道微环境分离的阴道加德纳菌的抑制效应及其机制。方法 通过体外实验将中国健康女性阴道乳杆菌菌株和细菌性阴道病患者的阴道加德纳菌菌株共培养，观察乳杆菌对加德纳菌增殖活性的影响。将乳杆菌、阴道加德纳菌与阴道上皮细胞共培养，计算加德纳菌与上皮细胞的黏附情况，评价乳杆菌对加德纳菌黏附阴道上皮细胞的影响。比较乳杆菌培养的菌液、菌体、上清、阴道上皮细胞、乳杆菌菌体+阴道上皮细胞对加德纳菌增殖的抑制效应，分析乳杆菌抑制加德纳菌的可能机制。结果 对阴道加德纳菌增殖活性有显著抑制作用的乳杆菌菌株有5个(卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌和德氏乳杆菌)(P<0.05),其中3个菌株(卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌和詹氏乳杆菌)能够明显干扰加德纳菌对上皮细胞的黏附过程(P<0.05)。菌体、上皮细胞、上清、菌液的抑菌效果逐步递增，而菌体和上皮细胞同时存在时，其抑菌效果明显超过菌液。结论 健康女性阴道乳杆菌菌株可以抑制细菌性阴道病患者阴道加德纳菌的增殖活性，能干扰加德纳菌对阴道上皮细胞的黏附过程。乳杆菌是通过多种机制完成对加德纳菌的抑制效应的。
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  不同雌激素水平大鼠舌下神经核中ERα的表达

  李环, 梁军, 侯玉霞

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 735-739. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.009

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  目的 研究雌性大鼠去卵巢对雌激素受体ERα在舌下神经核表达的影响。方法 选取90只8周龄雌性SD大鼠，体质量（250±25）g,随机等量分为假手术组（sham组）、去卵巢组（OVX组）、去卵巢+雌二醇组（OVX+E₂组）,建立不同雌激素水平大鼠模型。sham组去除大鼠卵巢周围少量脂肪，OVX组去除卵巢，OVX+E₂组去除卵巢后皮下注射雌二醇；使用免疫组织化学检测ERα在舌下神经核表达；real-time PCR、Western blot检测ERα mRNA、蛋白表达。结果 三组大鼠舌下神经核均存在ERα阳性表达。与sham组比较，OVX组ERα mRNA及蛋白含量明显降低（P<0.01）;与OVX组比较，OVX+E₂组ERα mRNA及蛋白含量明显升高（P<0.01）;sham组和OVX+E₂组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 雌激素受体ERα在不同雌激素水平雌性大鼠舌下神经核均存在表达，ERα mRNA及蛋白的表达均受雌激素水平调节。
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  基于咽部分泌物蛋白质组学分析的术后咽痛机制研究

  李梦鸽, 张晨源, 赵子鑫, 苏学森, 苑昕, 田首元

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 740-745. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.010

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  目的 筛选术后咽痛(postoperative sore throat, POST)病理过程中的差异表达的蛋白质，探讨POST的发生机制。方法 收集山西医科大学第一医院择期手术行全身麻醉气管插管患者的咽部分泌物20例，根据其术后24 h是否发生咽痛将其分为咽痛组(POST组)和非咽痛组(对照组),各10例，并进行蛋白定量分析，筛选出样本中的差异蛋白谱，对差异蛋白进行基因本体论(gene ontology, GO)注释及京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG)通路分析。结果 POST组和对照组共同鉴定到3 419个蛋白，显著上调的蛋白有190个，显著下调的蛋白有16个。GO注释提示差异蛋白主要参与细胞的代谢、生物调节过程、应激反应及免疫过程。KEGG富集分析提示差异蛋白主要富集于Wnt、泛素介导的蛋白水解及氧化磷酸化等信号通路。结论 POST涉及的生物学过程较多，其中Wnt信号通路与疼痛关系密切，因此POST可能是通过该通路介导的结果。
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  HIF-1α通过调控H型血管生成参与牙周炎的发展

  张怡凡, 陈悦, 周硕, 玛尔娃·木拉提哈吉, 张思佳, 周欢

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 746-752. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.011

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  目的 探讨在牙周炎微环境中低氧诱导因子-1α（HIF-1α）和H型血管是否参与牙周炎-牙槽骨吸收过程。方法 将10只C57BL/6小鼠随机分为牙周炎组和对照组，每组5只；牙周炎组采用5-0丝线结扎C57BL/6小鼠双侧上颌第二磨牙，建立小鼠实验性牙周炎模型；对照组不予处理。结扎14 d后micro-CT检测小鼠上颌第二磨牙牙槽骨高度的变化，免疫组化实验分析牙周炎牙槽骨缺损处组织蛋白酶K（CTSK）的表达情况，免疫荧光法分析牙周组织中H型血管（CD31⁺Emcn⁺）及HIF-1α的表达。结果 采用丝线结扎法成功构建小鼠牙周炎模型。micro-CT扫描结果示，与对照组相比，牙周炎组小鼠釉牙骨质界（CEJ）距牙槽嵴顶（ABC）的距离（CEJ-ABC）显著增加（P<0.001）;HE染色结果显示，牙周炎组出现较重炎症病理性反应。免疫组化结果显示，牙周炎组牙槽骨中CTSK的表达水平相较对照组更高（P<0.05）。免疫荧光结果显示，与对照组相比，牙周炎组牙周组织中HIF-1α表达水平提高（P<0.000 1）,H型血管生成增加，即CD31⁺Emcn⁺的表达更高（P<0.001）。结论 通过丝线结扎成功建立小鼠牙周炎模型，小鼠牙周炎牙周组织中HIF-1α和H型血管特异性升高，提示在牙周炎早期的缺氧微环境中，HIF-1α和H型血管参与牙周炎牙槽骨的骨吸收过程。
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  黄芪注射液中初生成分的鉴定及氨基酸类成分的含量测定

  曲婷丽, 闫丽秋, 周小雪, 王文涛, 张楠, 蔡均杰

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 753-762. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.012

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  目的 鉴定黄芪注射液中的初生成分，并以氨基酸类成分含量为指标，评价不同来源黄芪注射液的质量差异。方法 采用液相二级质谱(LC-MS/MS)法，以0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水为流动相，采用梯度洗脱检测黄芪注射液中初生成分。采用LC-MS/MS法，以10%甲醇水(含0.1%甲酸)和50%甲醇水(含0.1%甲酸)为流动相，采用梯度洗脱测定黄芪注射液中各氨基酸的含量，并采用主成分分析评价不同厂家黄芪注射液中氨基酸的含量差别。结果 不同厂家黄芪注射液中均检测到255个初生成分，主要为氨基酸类、有机酸类、糖类和含N类化合物。4个厂家黄芪注射液中氨基酸含量得分分别为-0.23,-1.77,-0.35,2.36。结论 不同厂家黄芪注射液中初生成分的种类一样，但含量不同；不同厂家黄芪注射液中氨基酸的含量差异较大。
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  微波消解-电感耦合等离子体质谱法同时测定阿拉伯胶中6种金属元素含量

  李鑫, 徐向炜, 姚羽

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 763-766. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.013

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  目的 建立一种微波消解-电感耦合等离子体质谱法同时测定阿拉伯胶中6种金属元素含量的方法。方法 用硝酸对阿拉伯胶进行微波消解后，采用电感耦合等离子体质谱法检测阿拉伯胶中汞、钒、镉、钴、砷、铅含量。结果 阿拉伯胶中汞、钒、镉、钴、砷、铅元素线性方程分别为Y=2 500.668 3ρ+370.020 0（n=6,R²=0.999 6）,Y=4 388.276 3ρ+25.000 0（n=6,R²=0.999 1）,Y=1 752.864 5ρ+0.000 1（n=6,R²=0.999 1）,Y=12 593.112 3ρ+25.000 0（n=6,R²=0.998 9）,Y=717.067 0ρ+15.000 0（n=6,R²=0.998 6）,Y=7 612.563 7ρ+170.010 0（n=6,R²=0.999 5）。6种元素线性范围均为0～100 ng/mL,在上述线性范围内，该方法精密度和重复性良好。汞、钒、镉、钴、砷、铅元素检出限分别为0.000 5 mg/kg、0.000 4 mg/kg、0.000 2 mg/kg、0.000 3 mg/kg、0.001 0 mg/kg、0.000 4 mg/kg;各元素定量限分别为0.001 7 mg/kg（汞）、0.001 2 mg/kg（钒）、0.001 8 mg/kg（镉）、0.001 0 mg/kg（钴）、0.003 4 mg/kg（砷）、0.001 3 mg/kg（铅）。6种元素平均回收率为91.12%～104.60%。结论 电感耦合等离子体质谱法检出限低、灵敏度高、专属性强，简便快捷，可用于阿拉伯胶中多种金属元素的含量检测。
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  葎草黄酮凝胶的制备及其对湿疹小鼠的初步药效学评价

  刘艳, 陈杨南, 伍丹情, 龙艳秋, 何宁

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 767-776. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.014

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  目的 制备一种葎草黄酮外用凝胶，探讨其对湿疹的治疗作用。方法 采用溶剂提取法提取葎草中的黄酮，以卡波姆940作为凝胶基质，葎草黄酮水溶液作为分散介质，甘油作为保湿剂和增稠剂，制备葎草黄酮凝胶，对凝胶的酸碱度以及体外释放率进行质量评价。采用2,4-二硝基氯苯在小鼠背后建立特异性湿疹模型，造模成功后，连续10 d小鼠背部涂抹葎草黄酮凝胶。观察记录湿疹小鼠30 min内瘙痒次数和瘙痒持续时间，免疫组织化学方法检测湿疹小鼠背部皮损处PAR-2的表达，酶联免疫吸附法测定血浆白细胞介素(IL)-2和IL-4的含量以及皮损组织中白三烯B4(LTB4)和白三烯C4(LTC4)的含量。结果 葎草黄酮最优提取条件为液料比20∶1,提取温度70℃,提取时间90 min,提取剂浓度60%乙醇，葎草黄酮得率为1.780 3%;葎草黄酮凝胶最优制备条件为卡波姆940含量为4.72%,甘油含量为15.75%,粗黄酮含量为0.79%。制备的葎草黄酮凝胶外观呈棕黄色，均匀细腻，pH范围在6～7之间，葎草黄酮凝胶中黄酮含量为3.20 mg/g,葎草黄酮凝胶48 h的体外释放率为68%。葎草黄酮凝胶显著降低了湿疹小鼠30 min内瘙痒次数与瘙痒持续时间(P<0.01),抑制湿疹小鼠皮损中PAR-2的表达(P<0.01),上调湿疹小鼠血浆中IL-2的表达(P<0.01),下调血浆中IL-4的表达(P<0.01),减少皮损组织中LTB4和LTC4的表达水平(P<0.01)。结论 成功制备葎草黄酮凝胶。葎草黄酮凝胶可以通过调节机体Th1/Th2平衡、抗炎和止痒对湿疹小鼠发挥治疗作用。
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  抑郁症患者血清短链脂肪酸水平与症状及生化指标的相关性

  张红娟, 王崴, 高敏, 安邦, 范雅娟, 贾敏, 李强

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 777-781. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.015

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  目的 探索抑郁症患者血清短链脂肪酸与生化指标及症状的相关性。方法 本研究共纳入50例住院的抑郁症患者为病例组，并同期海报招募了42名健康志愿者为对照组。采用气相色质谱法检测所有被试者血清中5种短链脂肪酸含量，包括乙酸、丁酸、戊酸、异戊酸和己酸。采用ELISA法检测血脂、血糖、胆汁酸、肌酐、尿素、尿酸、甲状腺素等生化指标。采用流式细胞法检测血液中的免疫指标(白细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、中性粒细胞百分比、淋巴细胞百分比、单核细胞百分比)。采用HAMD-17、HAMA-14他评量表以及PHQ-9、GAD-7、PSQI、SDS等自评量表评估抑郁症的临床症状。使用Spearman相关分析计算短链脂肪酸与血液免疫细胞、血糖血脂、甲状腺素等生化指标和临床症状量表的相关性。结果 病例组血清短链脂肪酸中乙酸、戊酸、异戊酸含量显著高于对照组(P<0.05)。相关性分析表明，在抑郁症患者中升高的乙酸与单核细胞百分比呈显著正相关(r=0.39,P<0.01);戊酸与尿酸呈负相关(r=-0.33,P<0.05),与葡萄糖(r=0.31,P<0.05)和GAD7(r=0.31,P<0.05)呈正相关；异戊酸与肌酐(r=0.29,P<0.05)、尿素(r=0.30,P<0.05)、HAMA中的精神焦虑因子(r=0.28,P<0.05)均呈正相关；丁酸与TSH呈正相关(r=0.34,P<0.05),与淋巴细胞数量呈负相关(r=-0.39,P<0.01);己酸与甘油三酯(r=0.36,P<0.05)、总胆固醇(r=0.42,P<0.01)、低密度脂蛋白(r=0.42,P<0.01)、HAMD中睡眠因子(r=0.30,P<0.05)均呈正相关。结论 抑郁症患者血清短链脂肪酸中乙酸、戊酸、异戊酸水平升高，可能与血糖、血脂、血常规、甲状腺功能相互作用，共同对抑郁症的发生产生影响。
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  KCNQ2基因相关癫痫谱系疾病临床特征与遗传学分析

  赵娇娇, 武运红, 韩虹, 纪惠茹, 赵晶晶

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 782-789. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.016

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  目的 分析KCNQ2基因突变所致癫痫患儿基因变异位置及类型与不同严重程度临床表型的关系，为相关患儿的精准治疗、用药疗程及预后评估提供帮助。方法 收集2021年10月至2024年3月在山西省儿童医院门诊及住院收治的已明确为KCNQ2基因突变患儿的临床资料及基因信息，回顾性分析其基因型及临床特征。结果 14例KCNQ2基因突变所致癫痫患儿中，包括12例单核苷酸变异和2例拷贝数变异；7例为新生变异，7例为遗传性变异；12例单核苷酸变异患儿中，5例为新报道的变异；14例患儿中，首次发作年龄为1 d至6月，最常见的发作形式是局灶性发作，8例患儿存在脑电图异常，5例患儿头颅磁共振结果存在异常；12例患儿使用钠通道阻滞剂癫痫发作得到有效控制。结论 本研究发现5例单核苷酸新变异，扩大了KCNQ2基因相关癫痫的基因谱。钠通道阻滞剂可有效控制KCNQ2基因变异所致癫痫发作，通过分析KCNQ2基因变异与临床表型的关系，可为患儿早期治疗选择及预后评估提供帮助。
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  VDR基因多态性与宫颈病变及HPV感染转归的相关性

  杨佳琦, 陈晓月, 高宇峰, 李娟, 李东燕

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 790-797. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.017

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  目的 分析维生素D受体（vitamin D receptor, VDR）基因多态性与宫颈病变的关系，并探讨其对高危型人乳头瘤病毒（high risk-human papillomavirus, HR-HPV）感染转归的影响。方法 选取2020年9月至2021年10月于山西医科大学第二医院行阴道镜检查的患者376例，将病理结果示慢性宫颈炎和宫颈上皮内瘤变Ⅰ级者设为对照组（188例）,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级及以上者（CINⅡ⁺）为病例组（188例）。收集患者外周静脉血行VDR基因多态性检测，包括FOKI、BsmL、Apal和Taql的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）位点，分析VDR基因多态性与宫颈病变的关系。对选择行宫颈锥形切除术进行治疗的142例CINⅡ-Ⅲ级患者的HPV转归情况进行6个月的随访，根据随访结果分为HPV转阴者和同一型别HPV持续感染者，即转阴组和持续感染组，分析VDR基因多态性是否影响HPV感染的转归。结果 随访结果显示，104例患者的HPV感染呈转阴状态，33例患者持续感染同一型别的HPV,而另外5例患者则感染了其他型别的HPV。VDR基因多态性检测结果表明，FOKI SNPs ff基因型及f等位基因与CINⅡ⁺发生显著相关（P<0.05）,并且与HR-HPV持续感染相关（P<0.05）;TaqI SNPs tt及Tt基因型均增加CINⅡ⁺发生的风险（P<0.05）,t等位基因与CINⅡ⁺发生风险增加有关（P<0.05）,但与HPV持续感染未见相关性（P>0.05）。结论 VDR基因多态性与宫颈病变及HR-HPV感染转归相关，其中FOKI SNPs ff基因型及f等位基因和TaqI SNPs tt、Tt基因型及t等位基因与宫颈病变的发生存在关联，并且FOKI SNPs ff基因型及f等位基因可能影响HR-HPV感染的转归结果。
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  基于真实世界数据的阿米替林不良事件信号挖掘

  吕艳华, 梁傲雪, 李琦

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 798-803. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.018

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  目的 基于真实世界数据(real-world data, RWD)挖掘阿米替林药物潜在不良事件信号，为其临床合理用药提供参考，进一步保障患者用药安全。方法 提取美国食品药品管理局的不良事件报告系统(FAERS)数据库2013年第一季度到2022年第四季度共40个季度的药物不良事件(adverse durg events, ADE)报告数据为研究对象，采用报告比值比法(ROR)和英国药品和保健产品监管局(MHRA)综合标准法挖掘阿米替林用药情况，分析符合风险信号检测标准的阿米替林ADE报告，并将其与中国阿米替林药品说明书和美国国立医学图书馆进行对比，以识别新的ADE并分析其规律。结果 提取到以阿米替林为首要怀疑药物(PS)的目标事件14 969例次，涉及3 169名患者，共检测出319个信号，包括各种制剂毒性、自杀既遂、药物过量、药物相互作用和抗胆碱能综合征等；涉及27个系统器官，主要集中于各类神经系统疾病、精神病类、各类损伤、中毒及操作并发症等。结论 使用FAERS挖掘到的阿米替林ADE信号与中国阿米替林药品说明书以及美国国立医学图书馆中描述基本一致，临床用药过程中除需关注上述提及的不良事件之外，还应密切关注阿米替林未收录但信号较强或报告数较多的不良事件，应及时评估用药风险并进行有效防范，确保患者的用药安全。
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  视觉记忆环路损伤模式在阿尔茨海默病中的研究进展

  郭紫文, 柏峰

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 804-809. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.019

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  <正>阿尔茨海默病（Alzheimer′s disease, AD）是老年期最常见的痴呆类型，占所有痴呆病例的60%～80%^[1],是一种常表现为记忆减退等多认知域损伤的神经系统退行性疾病。到2019年，全世界共有5 700多万人患有痴呆症，预计到2050年全球患病人数将突破1.5亿^[2]。该病给患者及家庭带来巨大经济负担，严重影响老年人的生活质量和寿命。AD的发病机制尚不明确，常规药物治疗只能改善临床症状，不能阻止其病理学进展。
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  GLRA1基因突变导致的新生儿过度惊吓反应症1例

  彭小青, 王薇, 赵燕, 张海艳, 易艳霞, 黄代, 钱娴

  山西医科大学学报. 2024, 55(06): 810-812. https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2024.06.020

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  <正>过度惊吓反应症（hyperekplexia, HPX）是一种罕见的神经疾病，由突然的、意想不到的听觉、触觉和视觉刺激引起的夸大的惊吓反射^[1]。主要临床表现为意想不到的外部刺激引起的夸大惊吓反应，然后是短暂的全身僵硬，甚至导致呼吸暂停，或婴儿猝死^[2]。迄今为止，已报道了GLRA1、SLC6A5、GLRB、GPHN和ARHGEF9 5个致病基因^[3]。