目的 建立新乐康片的高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，并测定新乐康片中3种指标成分的含量。方法 采用HPLC法，色谱柱为Caprisil C₁₈（250 mm×4.6 mm,5μm），流动相为乙腈-0.4%磷酸水溶液（含0.05%三乙胺）、梯度洗脱，流速0.8 mL/min，检测波长204 nm，柱温30℃，进样量10μL。建立的指纹图谱方法经过精密度、重复性、稳定性考察，生成对照指纹图谱，并采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2012版）计算相似度。对建立的3种指标成分的含量测定方法进行线性范围、检测限、定量限、精密度、稳定性、重复性、回收率考察。结果 新乐康片HPLC指纹图谱方法学考察合格，共标定28个共有峰，指认出异钩藤碱、钩藤碱、利血平3种成分，相似度均大于0.92。异钩藤碱、钩藤碱、利血平分别在1.540～30.80μg/mL、1.604～32.08μg/mL、0.956 0～19.12μg/mL范围内线性关系良好（r≥0.999 8）；检测限分别为0.092μg/mL、0.119μg/mL、0.074μg/mL；定量限分别为0.308μg/mL、0.400μg/mL、0.252μg/mL；精密度、稳定性、重复性试验结果的RSD均小于3.0%；平均加样回收率分别为100.2%,99.52%,98.98%;RSD分别为1.07%,0.88%,0.78%。结论 建立的HPLC方法灵敏、简便、准确，可用于新乐康片的质量控制。