实时荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测创伤弧菌方法的建立

禹乐, 朱启淦, 温路生, 许家伦, 郭健莲, 梁声强, 孟加榕

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山西医科大学学报 ›› 2025, Vol. 56 ›› Issue (02) : 213-218. DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2025.02.015

实时荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测创伤弧菌方法的建立

  • 禹乐, 朱启淦, 温路生, 许家伦, 郭健莲, 梁声强, 孟加榕
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摘要

目的 建立一种基于实时荧光重组酶聚合酶扩增(recombinant polymerase amplification,RPA)技术快速检测创伤弧菌的方法。方法 根据编码创伤弧菌溶血素vvhA基因的保守序列设计RPA引物,通过琼脂糖凝胶电泳筛选出最佳引物;根据筛选出的引物设计实时荧光探针,并建立实时荧光RPA检测体系。通过检测金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、铜绿假单胞菌、河流弧菌、溶藻弧菌等10种其他菌种评价检测体系的特异性;通过检测梯度稀释的创伤弧菌基因组DNA评价检测体系的灵敏度。用qPCR试剂盒平行检测10例模拟临床样本,验证检测体系的性能。结果 基于创伤弧菌vvhA基因保守序列建立起实时荧光RPA检测体系,该体系对金黄色葡萄球菌等10种其他菌种基因组DNA均无交叉反应。检测创伤弧菌的灵敏度为1×10~2 CFU/mL;检测模拟临床样本结果与qPCR方法的结果一致,准确率和检出率均为100%。结论 本研究建立的实时荧光RPA检测创伤弧菌方法灵敏度高、特异性强,操作简单快速,为创伤弧菌的现场快速检测提供一种新途径。

关键词

创伤弧菌 / vvhA基因 / 重组酶聚合酶扩增 / 核酸扩增 / 分子检测 / 快速检测

中图分类号

R440

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禹乐, 朱启淦, 温路生, 许家伦, 郭健莲, 梁声强, 孟加榕. 实时荧光重组酶聚合酶扩增技术快速检测创伤弧菌方法的建立. 山西医科大学学报. 2025, 56(02): 213-218 https://doi.org/10.13753/j.issn.1007-6611.2025.02.015

基金

福建省自然科学基金项目(2023J011843,2023J011841); 福建省漳州市科技拥军项目(ZZ2024KD04); 福建省漳州市科技项目(ZZ2021J09); 联勤保障部队第九○九医院自主项目(22MS001)

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