目的：评估具有双受体结合能力的H6N6禽流感病毒在体外人源性呼吸道细胞和组织的复制效率，行基因测序并分析其基因特点，探究该类病毒突破物种限制感染人类的能力。方法：应用固相亲和技术测定鸡源性H6N6禽流感病毒结合唾液酸受体的倾向，筛选具有双受体结合能力的H6N6禽流感病毒并评估其在人源呼吸道细胞A549、BEAS-2B和人呼吸道组织的复制，病毒全基因组测序、序列比较和同源性分析病毒8个基因节段氨基酸位点的变化。结果：具有双受体结合特性的H6N6亚型禽流感病毒均可在人源性呼吸道细胞A549、BEAS-2B细胞中有效复制，离体人支气管和肺组织病毒分离培养阳性、流感病毒核蛋白抗原检测阳性。4株具有双受体结合特性的H6N6亚型禽流感病毒来源于欧亚谱系，具有低致病性禽流感病毒的典型特征，HA受体结合域发现H156K、S263K基因突变，提示该2个位点突变可能与H6N6病毒具有双受体结合能力有关。结论：具有双受体结合特性的鸡源性H6N6亚型禽流感病毒无需适应即可在人呼吸道有效复制，提示该类禽流感病毒具有突破物种限制感染人类的风险，对人类健康和公共卫生安全形成潜在威胁。