目的：利用非靶向代谢组学联合网络药理学研究香蜂草苷改善非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）脂代谢的作用机制。方法：将大鼠随机分为正常组、模型组和香蜂草苷组。模型组与香蜂草苷组给予高脂饮食（HFD）8周诱导NAFLD动物模型。灌胃给药，连续8周。采用苏木精—伊红（HE）、油红染色观察细胞形态和脂质堆积情况。用高分辨液相色谱—质谱（UPLCQTOF/MS）对大鼠肝组织进行代谢组学检测，并利用KEGG数据库分析代谢通路。采用网络药理学对香蜂草苷与NAFLD共同作用的靶点进行预测，并联合代谢组学进一步分析潜在的靶点。结果：香蜂草苷明显减轻大鼠肝损伤、抑制肝脏脂质的过度沉积；正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）分析显示组间的代谢物有显著差异，火山图显示正常组与模型组存在404个差异代谢物（上调293个，下调111个），模型组与香蜂草苷组存在147个差异代谢物（上调95个，下调52个）；代谢通路分析显示差异代谢物主要富集于鞘脂代谢通路；网络药理学筛选药物与疾病共同靶点共139个，联合代谢组学和网络药理学分析显示，香蜂草苷可通过调节TNF、Bcl2、Mapk8、Pik3ca、Akt1、mTOR、Gsk3β来调控鞘脂代谢通路和胰岛素抵抗。结论：香蜂草苷能够通过鞘脂代谢通路和胰岛素抵抗调节脂质代谢紊乱从而发挥治疗NAFLD的作用。