目的：探讨缺氧环境对内皮集落形成细胞（ECFCs）血管生成能力的影响及甲基转移酶样3（METTL3）的调控作用。方法：分离、培养犬外周血ECFCs。实验分为正常对照组与缺氧实验组。缺氧实验组分别使用含50μmol/L、100μmol/L和200μmol/L氯化钴（CoCl₂）的培养基处理细胞24 h，对照组CoCl₂浓度为0。CCK-8检测不同浓度CoCl₂对ECFCs增殖的影响，实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达，筛选适宜浓度的CoCl₂用于缺氧环境构建。Transwell实验和管形成实验分别检测ECFCs迁移和血管生成能力。RT-qPCR和western blotting检测血管内皮生长因子（VEGF）、CD31、METTL3、miR-301a的表达情况。构建沉默METTL3慢病毒转染ECFCs，将ECFCs分为NC-shRNA组和METTL3-shRNA组。RT-qPCR和western blotting检测ECFCs细胞中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a表达水平的变化。结果：与正常对照组比较，50μmol/L和100μmol/L的CoCl₂培养ECFCs 24 h后可促进细胞增殖（均P<0.000 1）,HIF-1α随着CoCl₂浓度升高而高表达（P<0.01）。100μmol/L CoCl₂组中ECFCs迁移能力和血管生成能力提高（均P<0.01）,VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA水平表达升高（均P<0.01）,VEGF、CD31、METTL3蛋白表达升高（均P<0.01）。与NC-shRNA组比较，METTL3-shRNA组中VEGF、CD31、METTL3、miR-301a mRNA表达降低（均P<0.05）,VEGF、CD31、METTL3蛋白表达降低（均P<0.05）。结论：适宜的缺氧干预可提高ECFCs增殖、迁移和血管生成能力，METTL3/miR-301a轴可能参与调控血管生成。