目的：评估基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术鉴定临床常见致病丝状真菌的准确性。方法：采用AUTOF MS1000质谱系统，在原有商业参考库的基础上，增补构建自建数据库，采用125株临床分离菌株对自建库进行验证。结果：自建库新增菌株包括：皮肤癣菌3个属15种菌种，共76株；曲霉属30个菌种，共75株。以已有商业数据库加自建数据库为比对标准，125株临床分离菌株属水平鉴定率100%，种水平鉴定率达80.8%；以分子鉴定结果为金标准，正确鉴定率94.1%。其中，69株皮肤癣菌的种水平鉴定率为79.7%，正确鉴定率92.7%;56株曲霉菌种水平鉴定率为82.1%，正确鉴定率95.6%；错误鉴定6株，集中在须癣毛癣菌复合体（T. mentagrophytes series）菌种趾间毛癣菌/须癣毛癣菌/昆可努发癣菌（T. interdigitale/T. mentagrophytes/T. quinckeanum）交叉识别及Sect. Nigri中黑曲霉（A. niger）与塔宾曲霉（A. tubingensis）交叉识别。结论：通过补充完善自建库可提高MALDI-TOF MS鉴定丝状真菌的准确率；同时，参考数据库及时扩展和更新，以确保MALDI-TOF MS准确鉴定真菌菌种的能力。