目的：探究miR-126与lncRNA HOTAIR的靶向关系及其对SHH信号通路的调节作用，并研究结直肠癌发生发展的分子机制。方法：收集2018年2月至2019年2月于河北省沧州市人民医院进行手术治疗的患者的正常结直肠、结直肠息肉、不典型增生组织、癌前病变、结直肠癌组织及其癌旁正常组织标本，采用实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）、免疫组化分析HOTAIR、miR-126及SHH表达情况，starBase数据库、荧光素酶实验、RNA免疫共沉淀及RT-qPCR验证miR-126与HOTAIR、SHH的作用关系，MTT实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力。结果：结直肠癌组织中的HOTAIR和SHH、Glil、Smo蛋白表达上调，miR-126表达下调（P<0.05）。HOTAIR靶向抑制miR-126表达，miR-126靶向抑制SHH表达。与sh-NC组相比，sh-HOTAIR组SW480、HCT116细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力下降，miR-126 inhibitor组增加（P<0.05）;sh-HOTAIR+miR-126 inhibitor组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著高于sh-HOTAIR组，低于miR-126 inhibitor组（P<0.05）;miR-126 inhibitor+sh-SHH组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著低于miR-126 inhibitor组（P<0.05）。结论：HOTAIR靶向抑制miR-126表达，从而促进结直肠癌的发生发展，其机制可能与激活SHH信号通路的表达有关。