目的：利用Jurkat细胞增殖法建立胸腺肽活性的检测方法，并进行优化、验证。方法：培养Jurkat细胞，加入不同浓度的胸腺肽制剂分别刺激24 h或48 h，然后通过细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测Jurkat细胞的增殖水平。同时，并对利用Jurkat细胞增殖法检测胸腺肽活性的方法的专属性、重复性、灵敏度、精密度及适用性进行验证。结果：最佳检测条件：胸腺肽使用浓度范围为20～200μg/mL；刺激时间为24 h;CCK-8染液孵育时间为3 h。胸腺肽活性在20～200μg/mL范围内，增殖相对提高率具有一定的浓度依赖性；重复性验证RSD均小于15%;Jurkat细胞增殖法检测破坏后的胸腺肽活性显著降低，且与E-玫瑰花环法检测的胸腺肽活性结果呈正相关关系（r=0.75,P<0.05）。结论：基于Jurkat细胞增殖法检测胸腺肽活性的方法具有准确客观、灵敏和稳定等优点，能够满足胸腺肽活性检测要求，可进一步推广。