目的：基于网络药理学和生物信息学探讨补骨脂定（PSO）治疗鼻咽癌的作用及分子机制。方法：将鼻咽癌5-8F细胞分为5-8F组（0μmol/L PSO）,PSO低剂量组（10μmol/L组）、中剂量组（20μmol/L组）、高剂量组（30μmol/L组）。通过CCK-8、平板克隆探究PSO对鼻咽癌5-8F细胞增殖、克隆形成的影响；Pubchem、Pharmmapper、GeneCards数据库得到PSO治疗鼻咽癌的潜在靶点；DAVID数据库进行GO、KEGG分析；STRING、GEPIA数据库和Cytoscape软件构建网络图并得到核心靶点；分子对接、western blotting对核心靶点及主要通路进行验证。结果：PSO呈浓度依赖性抑制5-8F细胞的增殖；与5-8F组比较，PSO各剂量组细胞克隆形成能力降低（P<0.05）;PSO治疗鼻咽癌的潜在靶点共有66个，KEGG分析显示，与PI3K-Akt信号通路密切相关；核心靶点为ALB、HSP90AA1、SRC、EGFR、CASP3、ANXA5、MAPK1，其中ALB、HSP90AA1、ANXA5为生存相关靶点；PSO与核心靶点ALB、HSP90AA1、ANXA5具有良好的结合能力；与5-8F组比较，PSO高剂量组细胞中PI3K、p-PI3K、Akt、pAkt蛋白水平的表达降低（P<0.05）。结论：PSO可有效抑制鼻咽癌5-8F细胞的增殖、克隆形成，其抗鼻咽癌机制主要与抑制PI3K-Akt信号通路活性有关。