目的：研究鸡骨草提取物对对乙酰氨基酚（APAP）诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制。方法：将40只健康的雄性昆明种小鼠随机分为正常组、模型组、阳性组（200 mg/kg N-乙酰-L-半胱氨酸）、鸡骨草提取物高、低剂量组（60 g/kg、30 g/kg）；连续给药8 d。末次给药5 h后，除正常组外，其余各组小鼠腹腔注射265 mg/kg APAP建立肝损伤模型，测定血清及肝脏组织相关生化指标，并对肝脏组织进行病理形态学检查；运用核磁共振氢谱（1H-NMR）代谢组学技术建立肝代谢物谱，分析鸡骨草提取物对APAP诱导小鼠急性肝损伤肝代谢轮廓变化和潜在生物标志物的影响。结果：与模型组比较，鸡骨草提取物各剂量组均能著降低谷草转氨酶（ALT）、谷丙转氨酶（AST）、丙二醛（MDA）、白介素-6(IL-6)、一氧化氮（NO）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）表达水平（P<0.05或P<0.01），显著升高肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）水平（P<0.05或P<0.01）；鸡骨草提取物高剂量组显著降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)水平（P<0.05或P<0.01）；并能改善肝损伤；代谢组学结果显示，共筛选出差异代谢物11种，分别是谷胱甘肽、亮氨酸、牛磺酸、葡萄糖、甘氨酸、丙氨酸、肌酸等。主要被富集到苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，牛磺酸和亚牛磺酸代谢，谷胱甘肽代谢，甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等代谢通路。结论：鸡骨草提取物对APAP诱导小鼠药物性肝损伤具有保护作用，其机制与抗氧化应激及氨基酸代谢、谷胱甘肽代谢和糖代谢等有关。