人乳头瘤病毒（HPV）是一种常见的传染性病原体，目前与HPV感染相关的宫颈、肛门和口咽癌发病率持续增高，已经成为当下全球癌症防治的热点。由于HPV的生命周期对多层上皮宿主细胞分化程序的依赖性以及种属特异性，使得建立一个适合的HPV体外感染模型十分困难。随着三维（3D）细胞培养系统的出现，克服了这一障碍，这一系统完整地再现了上皮细胞的分化，为完成HPV的生命周期提供了一个良好的生存环境，是更好地研究HPV相关癌症的发生发展以及治疗药物的体外模型。本文将从HPV特性的角度分析3D细胞培养在HPV相关癌症研究中的优势，介绍适用的3D细胞培养方式，总结分析3D细胞培养在HPV相关癌症研究中应用及展望，为优化研究HPV相关癌症的3D细胞培养模型提供理论依据。