酮病是围产期奶牛常见的能量代谢紊乱疾病,主要病理因素为能量负平衡（NEB）所致的高非酯化脂肪酸（NEFA）血症。由于肝脏无法完全氧化过量的NEFA,导致其不完全氧化生成大量酮体或重新酯化沉积于肝脏,最终引发酮病和脂肪肝。在各种肝病病程中,肝脏微环境缺氧现象普遍存在。缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）在脂代谢调控中发挥着关键作用。然而,HIF-2 α与奶牛酮病中肝脂代谢紊乱的关系尚不明确。本研究旨在利用奶牛肝脏组织和体外分离的原代奶牛肝细胞,探究高浓度NEFA对肝细胞氧稳态和HIF-2α表达的影响。在体内,通过测量奶牛肝脏组织中甘油三酯（TAG）含量明确肝脏脂蓄积程度,通过免疫组化染色、Western blot和qRT-PCR检测肝脏HIF-2α的蛋白表达水平和基因转录水平;在体外试验中,向原代奶牛肝细胞添加不同浓度的NEFA,通过油红染色和TAG含量检测测定脂肪变性程度,并利用免疫荧光染色、Western blot和qRT-PCR检测HIF-2α的表达水平,同时使用[Ru（dpp）₃]Cl₂缺氧探针检测细胞内氧水平。研究结果显示,酮病奶牛肝脏中TAG含量显著增加、HIF-2α蛋白和mRNA表达水平显著上调,高浓度NEFA诱导原代奶牛肝细胞中脂质蓄积和HIF-2α表达水平显著上调,且伴随细胞内缺氧现象。该研究表明,HIF-2α在酮病奶牛肝脏和高浓度NEFA诱导的原代奶牛肝细胞中均显著“激活”,并揭示高浓度NEFA可诱导肝细胞缺氧,为进一步研究酮病奶牛肝脂代谢紊乱的分子机制提供了潜在靶点。