为了评估外源蛋白chIFN-γ-chCD154对白来航鸡感染鼠伤寒沙门菌(Salmonella typhimurium)的预防效果,并初步探讨其潜在机制。利用大肠杆菌表达蛋白chIFN-γ、chCD154和chIFN-γ-chCD154,经饮用水口服免疫鸡,连续3 d后,用鼠伤寒沙门菌灌胃感染。在感染第5天,通过Western blot、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和组织病理学等试验结果发现,较chIFN-γ和chCD154预处理,chIFN-γ-chCD154预处理可协同提高感染鸡的存活率,降低感染鸡肝脏和盲肠的细菌载量,减轻感染鸡肝脏和盲肠病理损伤。对其作用机制研究发现,chIFN-γ-chCD154可显著抑制盲肠中Toll样受体-4 (Toll-like receptor 4,TLR-4)和髓细胞分化因子-88 (myeloid differentiation primary response gene 88,MyD88) mRNA水平表达量,进而抑制NF-κB及促炎细胞因子(TNF-α和IL-6)在mRNA水平的表达,维持肠道紧密连接蛋白(zo-1、cla udin-1、occludin)的完整。与单一蛋白预处理相比,chIFN-γ-chCD1 54预处理还可显著上调鼠伤寒沙门菌感染外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)中维生素D (vitamin D,VD)通路相关基因(cyp27b1、VD受体vdr、抗菌肽AvBD7和cathelicidin-b1) mRNA水平的表达。菌落计数结果表明,chIFN-γ-chCD154组中沙门菌数量最低。ChIFN-γ-chCD154还可以上调感染鸡盲肠中经黏液真杆菌属、瘤胃球菌属、肠球菌属和粪杆菌属等有益菌的相对丰度,下调葡萄球菌属等有害菌的相对丰度,从而改善肠道菌群失调。综上,chIFN-γ-chCD154可激活鼠伤寒沙门菌感染鸡体内VD-抗菌肽信号通路,抑制TLR-4/MyD88/NF-κB炎症信号通路,显著改善鸡的肠道屏障功能,减少肝脏和盲肠炎性损伤,并改善盲肠微生物菌群结构,促进肠道健康,为将chIFN-γ-chCD154开发为安全、有效的替抗制剂提供理论依据。