为调查化脓隐秘杆菌在奶山羊乳房炎中的分布及其生物学特性，本研究从陕西省关中地区9个奶山羊养殖场中采集67份患乳房炎的奶山羊乳汁样品，经细菌分离培养获得21株化脓隐秘杆菌。对21株分离菌进行8种毒力基因PCR扩增，使用微量肉汤稀释法检测21株分离菌对10种抗菌药物的敏感性，利用Illumina NovaSeq 6000二代测序技术对选取的9株分离菌进行基因组测序，最后将分离菌经乳导管接种小鼠后验证其致病性。毒力基因检测结果显示，21株分离菌中plo、cbpA、nanH、nanp、fimA、fimC、fimE基因的阳性率分别为100.0%、38.1%、52.6%、31.6%、61.9%、57.1%和52.4%,而fimG基因均未检出，该结果与二代测序基因组比对结果一致。药物敏感性试验结果显示，分离菌对克林霉素(CLI)、头孢噻呋(CEF)和万古霉素(VAN)的敏感率为100.0%,对青霉素(PEN)、红霉素(ERY)、磺胺异噁唑(SXT)、氟苯尼考(FFC)、四环素(TE)、庆大霉素(GEN)和恩诺沙星(ENR)的耐药率分别为76.2%、52.1%、52.4%、52.4%、47.6%、42.9%和33.3%,其中至少对3种抗菌药物耐药的菌株比例为71.4%(15/21);使用ResFinder对耐药基因比对分析发现，9株分离菌株基因组包含8种耐药基因，分别是介导氨基糖苷类抗生素耐药的ant(2'')-Ia和ant(3'')-Ia、介导氯霉素类抗生素耐药的cmlA1和cmx、介导大环内脂类抗生素的erm(X)和lnu(A)、介导磺胺类抗生素耐药的sul1和介导四环素类抗生素耐药的tet(W),其中除tet(W)、cmlA和erm(X)外，此前，国内化脓隐秘杆菌分离株中尚未见其他耐药基因的相关报道。动物致病性试验中，小鼠接种分离菌后24 h出现乳腺红肿、充血、腺体组织炎性细胞浸润等现象，表明分离菌对小鼠乳腺组织有致病力。本研究针对奶山羊乳房炎源化脓隐秘杆菌的生物学特性及致病性开展初步研究，丰富了其耐药性及基因组数据，为奶山羊规模化养殖过程中化脓隐秘杆菌病的防治提供了参考依据和用药指导。