猪圆环病毒3型Cap蛋白的高密度发酵工艺及免疫评价

李可乐, 许景龙, 耿笑林, 王志飞, 梁严予, 莫晓琳, 黄玉欣, 逄文强, 田克恭

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (12) : 2507-2513. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.12.01

猪圆环病毒3型Cap蛋白的高密度发酵工艺及免疫评价

  • 李可乐, 许景龙, 耿笑林, 王志飞, 梁严予, 莫晓琳, 黄玉欣, 逄文强, 田克恭
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摘要

为了实现猪圆环病毒3型(PCV3) Cap蛋白在重组大肠杆菌中的高效表达,在10 L发酵罐中考察溶氧(DO)控制策略、氧消耗速率(OUR)控制策略、DO和OUR联合控制策略对目的蛋白表达的影响;通过选择最佳的OUR控制范围确定重组大肠杆菌的高密度发酵工艺;对高密度发酵的蛋白进行SDS-PAGE、Western blot鉴定和免疫评价。结果表明:DO控制策略和OUR控制策略的目的蛋白表达量偏低,检测发现乙酸是影响目的蛋白表达量的主要因素,当乙酸质量浓度达到1.02 g/L时目的蛋白的表达量降低55.8%。DO和OUR联合控制策略在补料前以DO作为控制供氧的参数,在补料后以OUR作为控制供氧的参数,保持OUR值在每小时140~160 mmol/L,可以减少乙酸的生成,目的蛋白的表达量最高为650 mg/L。Western blot鉴定结果显示目的蛋白具有良好的反应原性和特异性。动物试验结果显示二免后抗体阳性率为100%,目的蛋白具有良好的免疫原性。说明DO和OUR联合控制的高密度发酵工艺可以实现PCV3 Cap蛋白在发酵罐上的高效可溶性表达,为进一步进行疫苗研制奠定了基础。

关键词

PCV3 Cap蛋白 / 乙酸 / DO和OUR联合控制 / 高密度发酵

中图分类号

S859.797 / TQ920.6

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李可乐, 许景龙, 耿笑林, 王志飞, 梁严予, 莫晓琳, 黄玉欣, 逄文强, 田克恭. 猪圆环病毒3型Cap蛋白的高密度发酵工艺及免疫评价. 中国兽医学报. 2024, 44(12): 2507-2513 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.12.01

基金

“十四五”国家重点研发计划资助项目(2021YFD1801302-2,2023YFD1800505)

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