登革病毒(dengue virus, DENV)引发的疾病严重威胁着人类的生命健康，我国尚无对应的有效疫苗，本研究拟制备出1种针对Ⅱ型DENV的重组亚单位候选疫苗。以Ⅱ型DENV EDⅢ基因为目的基因，构建重组真核表达质粒并转染至悬浮细胞中表达目的蛋白，筛选合适的免疫剂量来免疫小鼠，进行免疫原性分析。成功构建出DENV重组真核表达载体，转染至HEK-293F表达目的蛋白，大小约为15 kDa。以铝盐为佐剂与不同剂量的重组蛋白混合免疫小鼠，分析免疫原性，首次免疫后第35天时，3个蛋白免疫组小鼠血清中特异性抗体水平明显高于佐剂组和PBS组，10μg D2EDⅢ蛋白组和20μg D2EDⅢ蛋白组特异性抗体水平分别是5μg D2EDⅢ蛋白组的1.43和1.56倍，抗体分型偏向于IgG1,表明本研究制备的Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗主要提高体液免疫应答，但3个蛋白免疫组之间IgG1抗体水平差异并不显著。综合免疫效果及疫苗成本，每只小鼠最佳目的蛋白免疫剂量确定为10μg。本研究制备了1种Ⅱ型DENV重组亚单位候选疫苗，为DENV的预防提供参考。