猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用

何嘉敏, 庞旋飞, 罗律, 杨佳臻, 张宝真, 伍建敏, 刘文娜, 李中圣, 白挨泉

PDF(7108 KB)
PDF(7108 KB)
中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (11) : 2316-2323. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.11.02

猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用

  • 何嘉敏, 庞旋飞, 罗律, 杨佳臻, 张宝真, 伍建敏, 刘文娜, 李中圣, 白挨泉
作者信息 +
History +

摘要

为研制一种可以应用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)实时荧光定量PCR(RT-qPCR)核酸检测的阳性质控品,本研究使用MS2噬菌体装甲RNA(Armored RNA)技术制备PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品。将扩增的PRRSV-1和PRRSV-2 M基因进行纯化回收,连接到内含MS2成熟酶蛋白基因与衣壳蛋白的pET28b载体,通过转化至BL21(DE3)后,经IPTG诱导表达,利用PEG6000沉淀法纯化,制备出内含PRRSV M基因装甲RNA病毒样颗粒(AR-PRRSV)。后续进行性能评估,作为PRRSV-1和PRRSV-2 M基因的阳性质控品,AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M使用YY/T 1652-2019标准进行计算,数据表明均匀性良好,-20、4、25℃能稳定保存60 d, 37℃能稳定保存30 d。使用RT-qPCR进行初步定量后,利用数字定量PCR(ddPCR)对制备的装甲病毒样颗粒AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M进行定值,结果10~4拷贝/μL的AR-PRRSV1M和AR-PRRSV2M ddPCR定值均为(1.33±0.50)×10~4拷贝/μL。本研究结果表明,应用定值后的AR-PRRSVM,能够实现对检测全过程(核酸提取、反转录和RT-qPCR)的质量控制。

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒 / 装甲RNA / 核酸检测 / 质控品

中图分类号

S852.651

引用本文

导出引用
何嘉敏, 庞旋飞, 罗律, 杨佳臻, 张宝真, 伍建敏, 刘文娜, 李中圣, 白挨泉. 猪繁殖与呼吸综合征病毒MS2装甲病毒样颗粒质控品的制备及应用. 中国兽医学报. 2024, 44(11): 2316-2323 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.11.02

基金

广东省科技计划资助项目(2020B1212070023);; 以农产品为单元的广东省现代农业产业技术体系创新团队建设资助项目(生猪)(090/BKS209152)

评论

PDF(7108 KB)

Accesses

Citation

Detail

段落导航
相关文章

/