基于TPO18基因蛋白的兔豆状囊尾蚴感染间接ELISA检测方法的建立

王泽祥, 罗永禄, 薛萍, 车亮, 王由森, 苟惠天, 孙晓林

PDF(3768 KB)
PDF(3768 KB)
中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (06) : 1213-1222. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.06.16

基于TPO18基因蛋白的兔豆状囊尾蚴感染间接ELISA检测方法的建立

  • 王泽祥, 罗永禄, 薛萍, 车亮, 王由森, 苟惠天, 孙晓林
作者信息 +
History +

摘要

豆状囊尾蚴病是由豆状带绦虫(Taenia pisiformis)的幼虫——豆状囊尾蚴(Cysticercus pisiformis)寄生于家兔等啮齿类动物所引起的一种寄生虫病,该病威胁养兔业发展和兔肉食品安全。为了鉴定TPO18抗原在豆状囊尾蚴和豆状带绦虫的分布,并建立兔豆状囊尾蚴病抗体间接ELISA检测方法,本研究原核表达兔豆状囊尾蚴18 kDa抗原,经蛋白纯化获得了可溶性的TPO18蛋白。TPO18蛋白免疫家兔制备了效价达1∶51 200多克隆抗体。蛋白免疫印迹鉴定多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18的反应原性,免疫组织化学法鉴定兔豆状囊尾蚴和豆状带绦虫虫体TPO18抗原分布,多克隆抗体与兔豆状囊尾蚴总蛋白、豆状带绦虫总蛋白及重组蛋白TPO18具有良好的反应原性,兔豆状囊尾蚴TPO18抗原主要分布于生发层和绒毛层,豆状带绦虫TPO18抗原主要分布在吸盘及吸盘周围和集合管上层细胞及绒毛层。以TPO18重组抗原包被酶标板,优化确定间接ELISA各项技术参数,建立基于TPO18抗原的间接ELISA抗体检测方法。经优化后的ELISA检测方法的检测条件为血清稀释度1∶100,抗原包被质量浓度为5 mg/L,抗原包被条件37℃1 h+4℃过夜,封闭条件1%BSA 37℃封闭60 min,血清反应时间60 min,酶标二抗稀释度1∶1 000,酶标二抗作用时间60 min,底物反应时间15 min,临界值0.295。ELISA方法的灵敏性、特异性和重复性检测结果表明,该方法灵敏度较高,特异性较好,不与兔瘟、兔肝片吸虫、兔球虫、兔弓形虫等的阳性血清发生交叉反应;批内和批间重复性试验的变异系数均小于7%,重复性良好。运用该ELISA方法与剖检检测试验分别对86份临床血清样品检测,两种方法检测结果符合率为97.7%。综上所述,本研究成功建立了兔感染豆状囊尾蚴抗体的间接ELISA方法,为兔感染豆状囊尾蚴后感染情况监测提供了新的监测方法。

关键词

兔豆状囊尾蚴 / 18 kDa抗原 / 免疫组织化学 / 酶联免疫吸附试验 / 特异性 / 敏感性

中图分类号

S858.291

引用本文

导出引用
王泽祥, 罗永禄, 薛萍, 车亮, 王由森, 苟惠天, 孙晓林. 基于TPO18基因蛋白的兔豆状囊尾蚴感染间接ELISA检测方法的建立. 中国兽医学报. 2024, 44(06): 1213-1222 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.06.16

基金

甘肃省自然科学基金资助项目(21JR7RA823); 国家自然科学基金资助项目(32160843,31460659); 甘肃省国际科技合作专项资助项目(144WCGA169); 甘肃省重点研发计划-社会发展类资助项目(18YF1FA080)

评论

PDF(3768 KB)

Accesses

Citation

Detail

段落导航
相关文章

/