为满足对非洲猪瘟病毒(ASFV)的早期、超快速、精准基因检测的市场需求，本研究根据ASFV的p72基因保守区和猪内源性内标(endogenous internal standard, EIS)cytb基因序列设计双重qPCR的引物和探针，并在反应体系中加入UNG酶防污染系统，建立了用于检测ASFV的快速、高灵敏EIS-qPCR方法。结果显示，该方法时间短，可在30 min内完成ASFV的qPCR检测；灵敏度高，最低检测限为4.12拷贝/μL;特异性强，对ASFV p72基因呈现特异性扩增，对猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)、猪圆环病毒2型(PCV2)均无扩增；重复性好，变异系数(C_v)小于2%;防污染能力强，可有效消除低剂量气溶胶污染产生的假阳性扩增。146例临床样本的检测结果与商业化ASFV检测试剂盒检测结果比较，符合率为100%。本研究建立的EIS-qPCR技术与现有同类技术相比，具有检测更快速、灵敏度更高等特点，适合ASFV感染早期的快速诊断，可为非洲猪瘟的监测和疫情的精准防控提供可靠的技术支撑。