白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡

曹丽光, 刘思宇, 栾奕, 高文睿, 刘恺, 李国金, 杨子凤, 董忆飞, 李心慰, 高文文, 刘国文

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (05) : 1032-1040. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.24

白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡

  • 曹丽光, 刘思宇, 栾奕, 高文睿, 刘恺, 李国金, 杨子凤, 董忆飞, 李心慰, 高文文, 刘国文
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摘要

围产期奶牛能量负平衡(negative energy balance, NEB)可引起高非酯化脂肪酸(non-esterified fatty acids, NEFA)血症。大量NEFA被乳腺组织吸收,可诱发细胞凋亡。白藜芦醇(resveratrol, RES)是一种非黄酮类多酚有机化合物,具有抗炎抗凋亡等作用。目前,尚不清楚RES对高NEFA处理的乳腺上皮细胞(MAC-T)的周期阻滞和凋亡的影响。因此本研究主要探讨NEFA对MAC-T细胞周期阻滞和凋亡的影响以及RES是否能改善高浓度NEFA对MAC-T的病理作用。添加不同浓度的NEFA处理MAC-T,利用CCK-8细胞活力检测试剂盒检测细胞活力,通过Western blot检测细胞凋亡相关分子Caspase-3、Bcl-2、Bax和细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达水平,采用qRT-PCR法检测细胞凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2、Bax的mRNA转录水平,利用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡。结果显示,NEFA剂量依赖性地诱导MAC-T细胞凋亡,降低细胞活力,阻滞细胞周期。高NEFA显著增加Bax、Caspase-3的mRNA转录水平和Bax/Bcl-2、cleaved-Caspase-3/Caspase-3蛋白表达,降低细胞周期调节因子Cyclin D1的蛋白表达及Bcl-2 mRNA转录水平。此外,单独添加最高浓度80μmol/L的RES对MAC-T细胞活力无影响,且不会引起细胞凋亡。用高浓度NEFA处理细胞并分别添加10、20、40μmol/L RES,RES的添加可以缓解NEFA导致的Cyclin D1蛋白水平下降,降低Bax/Bcl-2和Cleaved-Caspase-3/caspase-3蛋白水平。同时,RES的添加还可以降低G2/M和S期细胞百分比和细胞凋亡。结果表明,NEFA可以引起细胞周期阻滞和细胞凋亡,RES能缓解NEFA诱导的MAC-T细胞周期阻滞和细胞凋亡。

关键词

白藜芦醇 / 乳腺上皮细胞 / 非酯化脂肪酸 / 细胞周期 / 细胞凋亡

中图分类号

S853.7

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曹丽光, 刘思宇, 栾奕, 高文睿, 刘恺, 李国金, 杨子凤, 董忆飞, 李心慰, 高文文, 刘国文. 白藜芦醇缓解NEFA诱导的奶牛乳腺上皮细胞的周期阻滞和凋亡. 中国兽医学报. 2024, 44(05): 1032-1040 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.24

基金

国家自然科学基金青年基金资助项目(32302941)

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